淋巴造血系统肿瘤检测项目介绍ppt课件

1、封面一（深色底）本案主题标题文字为28号方正兰亭粗黑简体你的部门名称或本案引导标题2012年9月12日淋巴造血系统肿瘤检测项目介绍淋巴造血系统肿瘤检测项目介绍艾迪康医学检验中心艾迪康医学检验中心 实验室实验室 孙晓柏孙晓柏血液肿瘤分类进程血液肿瘤分类进程MICMMICMFAB形态学诊断(Morphology)免疫学检查(Immunology )细胞遗传学检查(Cytogenetics)分子遗传学检查(Molecular)WHY?WHY?主观影响方法学限制检测方法检测方法形态学特点形态学特点细胞遗传学细胞遗传学免疫分型免疫分型分子生物学分子生物学准确诊断准确诊断l形态学形态学: :细胞学：外周血

2、、骨髓涂片，淋巴结穿刺组织学：骨髓活检、淋巴结活检、血凝块l免疫学：免疫学：流式细胞术（FCM）免疫组织化学l细胞遗传学：细胞遗传学： 核型分析（染色体异常）、荧光原位杂交（FISH）l分子遗传学：分子遗传学： 融合基因（RT-PCRQ-PCR)/基因突变（DNA测序）形态学形态学骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构，二者相互补充相互验证不能相互替代。长度长度 1.5cm1.5cm，血凝块，血凝块免疫固定电泳免疫固定电泳免疫固定电泳对多发性骨髓瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、分泌型骨髓瘤、轻链病、重链病等研究有重大意义。常规检测免疫球蛋白中常见的IgG,IgA,IgM,IgD和IgE概率极低

3、，当检测结果出现单独轻链，不能排除是IgE和IgD结合轻链的可能，若需要确定是否为游离轻链，将进一步检测。多发性骨髓瘤患者在治疗后易出现轻链丢失，电泳图谱与重链病图谱相似，此类患者建议加做尿液的免疫固定电泳检测是否存在游离轻链，以作进一步区分。 遗传学遗传学分子生物学分子生物学融合基因筛查融合基因筛查适用患者适用患者 本筛查项目主要用于筛查ALL、AML、CML、AMMOL、CMML、MDS等血液病病种可能出现的31种融合基因或癌基因，及其融合基因的110余种剪切变异情况。适合无法确定融合基因类别的初诊患者，适合无法确定融合基因类别的初诊患者，便于医生对血液病患者进行分子标志物的确定，并进行后

4、续微小残留病灶的监控。 本项目建议配合染色体核型分析一起检测，建议配合染色体核型分析一起检测，以免由于染色体数目异常或携带少见融合基因而造成漏诊。 不同疾病筛查项目不同疾病筛查项目ALL融合基因筛查（18种）AML融合基因筛查（23种）APL融合基因筛查（3种）MLL融合基因筛查（11种）APLAPL的的5 5种融合基因亚型种融合基因亚型 PML-RAR -L59BCDEF22015388419 462A59BCDEF22015388419 462ARAR PMLPLZF-RAR PLZF59BCDEF22015388419 46257 91B1B2Coiled coil129 151204

5、215224361 394C3HC459BCDEF22015388419 46257 91B1B2Coiled coil129 151204 215224361 394C3HC4ZnZnPOZPZnZnZnZnZnZnZn673455406377120255TransTrans- -regulationregulationZnZnPOZPZnZnZnZnZnZnZn673455406377120255TransTrans- -regulationregulation59BCDEF22015388419 462ZnZnPOZP455406377120255TransTrans- -regulat

6、ionregulation59BCDEF22015388419 462ZnZnPOZP455406377120255TransTrans- -regulationregulationPML-RAR -SABCDEF57 91B1B2Coiled coil129 151204 215224361 394550NLS633C3HC4S-P rich57 91B1B2Coiled coil129 151204 215224361 394550NLS633C3HC4S-P rich59BCDEF22015388419 46257 91B1B2Coiled coil129 151204 21522436

7、1 394550C3HC4NLS59BCDEF22015388419 46257 91B1B2Coiled coil129 151204 215224361 394550C3HC4NLSZnZnZnZnZnZnZn67345559AZnZnZnZnZnZnZn67345559ARAR -PLZFGCMLCML的三种融合基因亚型的三种融合基因亚型BCR-ABL, a model of activation of protein tyrosine kinase (PTK) in leukemo-genesis: growth and survival advantages融合基因项目融合基因项目F

8、ABFAB分类分类检测意义检测意义AML-ETOAML-M2M2出现AML1-ETO融合基因阳性，考虑加做血液C-KIT基因突变，确定疾病风险分层。 DEK-CANAML-M2，M4，M1患者年龄一般较轻，且预后较差；此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案。 CBF-MYH11AML-M4eo具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好。同时长期监控，可提示复发风险。E2A-PBX1前B-ALL具有E2A-PBX1患者的预后较差，需给予强化治疗才能获得较好的预后。TEL-AML1前B-ALL儿童ALL中最常见，治疗反应佳，预后良好。FLP1L1-PDGFR嗜酸性粒细胞增多症可

9、见于嗜酸性粒细胞增多症。MLL-AF4前B-ALL在婴儿ALL中最多见，儿童成人中较低，此类患者病情凶险，预后差。患者对标准治疗方案很可能无效，需给予强化治疗，大剂量Ara-C与MTX有效。突变项目突变项目检测意义检测意义JAK-2 V617F /539-543已列入WHO2008 MPNs的诊断标准V617F见于90%以上的PV，约50%的ET、PMF；NPM1是AML预后良好的因素之一，单纯NPM1突变的AML患者预后较好，若同时伴随FLT3-ITD突变，将会影响AML患者对化疗药物诱导的缓解效果。C-kit常出现于AML1-ETO+患者，突变患者预后较差。FLT-ITDFLT3突变是急性

10、髓性白血病患者预后判断的重要标志。阳性者预后不良。FLT3-ITD和D835突变在AML中阳性率分别24%和7%，总阳性率超过30%。突变患者白细胞计数显著增高，还与临床预后密切相关。60岁以下的AML患者预后较差。N-rasN-ras基因点突变的检测可作为白血病缓解和复发的一项指标。发生N-ras基因突变的MDS患儿转化为白血病的机率较高。此基因突变存在于1130% AML。ABL激酶CML，特别是CML 急变期（AP-CML）的患者，对伊马替尼耐药的发生率在20-30%；耐药主要由ABL激酶区突变引起，其可导致药物疗效下降或失效。突变检测项目突变检测项目基因基因阳性率阳性率临床意义临床意义

11、预后预后与其他遗传异常相关性与其他遗传异常相关性KIT5%预后因素差t(8;21)inv(16)/t(16;16)FLT320-40%预后因素差-NPM130%（核型正常）对疾病进行临时性的定义良好 （如果没有FLT3突变）M4, M5CD34 -CEBPA10%对疾病进行临时性的定义良好M1，M2CD7+WHOWHO 20082008 新界定的突变新界定的突变技术交叉技术交叉TCRTCR和和IgHIgH重排项目重排项目有5-10%的患者无法通过常规方法辨别其淋巴系统的增生是恶性增生还是反应性增生。 正常淋巴细胞在成熟过程中重排是多克隆性的，但恶性肿瘤（98%）表现为单克隆性Ig和/或TCR基

12、因重排。适用患者及适应症：疑似淋巴瘤患者的良恶性鉴别诊断。淋系白血病患者的鉴别诊断及微小残留跟踪检测。 免疫学免疫学流式细胞术的应用目的流式细胞术的应用目的确定髓系和淋巴系别，及细胞分化阶段；鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病；确定髓系白血病各亚型（M0，M3，M6，M7）；对形态学分类不明/比例低的细胞进行定性（淋巴瘤-凝 血功能障碍或甲减等）；诊断急性混合细胞白血病（确诊）；诊断微小残留白血病或白血病浸润；辅助MPD/MDS诊断；判断白血病/淋巴瘤预后，指导治疗。微小残留病变检测微小残留病变检测抗体选择抗体选择白血病/淋巴瘤免疫表型检测（30CD）白血病/淋巴瘤免疫表型检测（20CD）

13、对于无法诊断或是临床倾向不明的患者，确定细胞系别来源及分化程度，辅助分型，提供诊断以及治疗依据。微小残留病灶检测（6CD） 有初诊资料并且观察到微小残留跟踪标记微小残留病灶检测（20CD） 无初诊资料或病情有复发情况MDS免疫表型检测（20CD）多发性骨髓瘤免疫表型检测（14CD）MICMMICM整合报告整合报告Pig-a基因的克隆性干细胞突变Glycosylphosphatidylinositol anchor，GPI缺失部分缺失：型细胞全部缺失：型细胞PNHPNH克隆检测克隆检测检测哪些细胞？红细胞 中性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞 血小板 FLAER气单胞菌溶素（aerolysin）直接连接于GPI锚蛋白，GPI阴性的PNH细胞对aerolysin出现抵抗。利用这一特性，制备出了采用荧光素（如ALEXA-488）标记aerolysin的变异体（FLARE），通过流式细胞术或激光共聚焦等方法分析GPI阳性或阴性细胞。 Michael J. Borowitz et al. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by flow cytometry. Cytometry Part B 2010; 78B: