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文档简介
1、教学目标:多肽结构的测定方法教学重点:了解末端残基分析法测定肽中氨基酸的排列顺序教学安排:Oi, O5 。6 ; 10min一、概述多肽与蛋白质都是由a氨基酸为结构单元,它们之间无严格界线。一般认为相对分子质量1万,能透过半透膜,不被三氯乙酸或浓硫酸所沉淀的为多肽。多肽广泛存在于自然界,在生物体内起着重要作用,如谷-胱-甘肽保护人体免受毒素对细胞的侵袭,延缓人体衰老。对肽的研究有两方面工作:测定肽的组成和a氨基酸在肽链中排列顺序;合成多肽,保证测定结果的正确性,多肽结构测定大体分三步。1. 测定实验式将肽在酸性溶液中彻底水解,用色谱法分离确定氨基酸的种类、相对含量,计算出各种氨基酸的相对数目,
2、求出实验式。2. 确定分子式用化学方法或物理方法测定其相对分子质量,从而确定分子式。3. 末端残基分析法,测定多肽中氨基酸的结合顺序二、N端氨基酸分析有两种方法进行 N端氨基酸的分析1)彻底水解法用2, 4-二硝基氟苯与多肽的 N端氨基反应,然后彻底水解产物, 可确定N端的氨基酸:%0N0IIH_N-CHCNH CH-C TH FRJ+ HF0IINH-CH-C-OH +z 1这种方法可以一次得到全部氨基酸分子,也可确定N端氨基酸的组成。2)埃德曼(Edman)降解法用异硫氰酸苯酯与多肽的N端氨基反应,然后水解产物,得到N端氨基酸和少一个氨基酸结构单元的多肽,分析N端氨基酸结构,回收少一个氨基
3、酸的多肽。再重复操作,逐步确定N端氨基酸结构,经过多次降解,可确定多肽的氨基酸种类和连接顺序:000iinh-CH-CNH-CH-C-NH-CH-C- iiiRR*IT00II11S11II I1111冬一 NH C_NHCH-Cj-NHCH _C _NH _CH _C R ; 卍R+NHCHc/NIC00IIIINH-CH-C-NH-CH-C iiRzK*(本基乙内酰硫脲)三、c端氨基酸的分析在羧肽霉作用下水解,有选择的使游离羧基的a氨基酸的酰胺键水解,对水解下来的氨基酸进行鉴定,确定结构:0 0 0UN -CH -C HH -CH -C -b UH -CH -C 0H + ILO 按肽鹫III2RR7 :R0 0 0-HN-CH-CNH-CH-C-OH + NH-CH-C -0HII丨RR1R*(降解后的多肽)经过反复多次降解,可以逐步把多肽的链结构顺序弄清楚。对于长的肽链可以先降解成较短的多肽,然后
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