流式细胞仪技术

1、流式细胞仪技术流式细胞仪技术 pptppt课件课件(9)(9)概概 述述流动室激光聚焦激光波长激光波长: 488nm, 635nm FSC和SSC的原理前向散射光(FSC)与侧向散射光(SSC)的含义前向散射光前向散射光侧向散射光侧向散射光血细胞双参数点图Fluorescein Isothiocyanate (FITC)异硫氰酸荧光素Phycoerythrin (PE)藻红素Allophycocyanin (APC)异藻蓝蛋白Peridinin-Chlorophyll Protein (PerCP)多甲藻黄素-叶绿素蛋白Tandem DyesPE-Texas Red (ECD)PE-Cy5 (

2、PC5)PE-Cy5.5 (PC5.5) (futures)PE-Cy7 (PC7) (futures)Propidium iodidePI 碘化丙碇常用荧光染料(488nm,633nm激发)荧光素的选择：荧光强度FITCPEAPC依次增加；弱信号采用PE或APC，强信号采用FITC荧光素的选择荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色FITC 488 525 免疫荧光 绿色PE(RD1) 488 575 免疫荧光 橙色 PerCP 488 670 免疫荧光 红色APC 633 670 免疫荧光 红色PI 488 620 DNA染色 橙红ECD 488 620 免疫荧光 橙红P

3、eCy5 488 675 免疫荧光 红色细胞分选前后示意图标本来源:外周血、骨髓、培养细胞、组织(经尼龙网300目过滤) 制成单细胞悬液标本浓度：106/ml-外周血白细胞计数，白血病人血标本需PBS稀释抗凝剂：EDTA、肝素-假设抗凝不佳，有凝块，那么不可检测。溶血剂：保持细胞形态、红细胞裂解完全。反响温度：2627C，室温避光。细胞处理：G1S phaseG2MG1食管癌细胞株的细胞周期表标志的存在、缺乏、过度表达等,对免疫性疾病、感染、肿瘤等疾病的诊断和治疗，免疫功能的重建和器官移植等均有重要的临床意义。Th1/Th2细胞的检测及应用一系列表达细胞因子的特定细胞群：T、B、NK和单核巨噬

4、细胞系统；I型细胞涉及细胞介导的免疫反响，迟发过敏反响、巨噬细胞活化、下调II型反响，病毒、某些细菌刺激；II型细胞涉及体液免疫反响，B细胞增生、多克隆Ig分泌、下调I型反响，原虫、过敏原刺激。血液疾病的检测凋亡细胞凋亡细胞n特性： 细胞内的内切核酸酶的激活，导致细胞中低分子量DNA的出现,进而减少了DNA的特异的荧光染色。 凋亡的细胞具有完整的细胞膜，对碘化丙啶Propidium iodide，PI染料具有排斥反响。 早期的细胞凋亡表现为细胞膜的不对称的丧失，即磷脂丝氨酸残基在质膜内外层分布的改变。利用一种抗凝结蛋白Annexin V，既能优先与负离子的磷脂如磷脂酰丝氨酸结合，又能与荧光染料结合的亲合性进行检测。凋亡细胞凋亡细胞流式细胞仪的分析方法流式细胞仪的分析方法Annexin 分析分析PI染色分析染色分析DNA断片的分析断片的分析Annexin 分析原理分析原理Annexin 分析图分析图PI 染色原理染色原理 PI(碘化丙啶,Propidium iodide)是一种插 入性的荧光染料，能够嵌入双链核酸DNA和RNA的碱基对中，经RNA酶的处理后，细胞中的RNA被消化掉，PI可对