基因多态性分析

1、精品文档人基因多态性分析一、实验目的1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床 表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。二、实验原理基因多态性(gene polymorphism )是指在一个生物群体中，同时存在两种 及以上的变异型或基因型或等位基因，也称为遗传多态性(genetic polymorphism)。人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及遗传性疾病的分子机制有重大意义；与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病的诊断标记，并为分离克隆致病基因提供依据；病因未知的疾病 与候选基

2、因多态性的相关性分析，可用于辅助筛选致病易感基因。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction Restriction Fragment Length Polymorphism， PCR-RFLF分析是一种常用的DNA分子标记。原理是通过PCFT增获得目的基因。若目的基因存在等 位变异(多态性)，且变异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上，使酶切位 点增加或者消失，则酶切结果就会产生大小不同的片段，即片段长度多态性，再利用琼脂糖凝胶电泳分离，可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性 图谱比较，可确定是否变异。应用PCR-RFLP可检测某一致病基因

3、已知的点突变，进行直接基因诊断，也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。三、器材与试剂1. 器材离心机。DNAT增仪。电泳仪。水平电泳槽。紫外检测仪。移液器。2试剂口腔拭子DNA抽提试剂盒。琼脂糖。1XTAE电泳缓冲液：980ml蒸馏水中加入50XTAE母液20ml。50XTAE母液：Tris 121g, 0.5M EDTA(pH8.0) 50ml，冰醋酸 28.55ml ,定容至 500ml。上样缓冲液(6X) ： 30mM EDT,40%(V/V)甘油，0.05% (W/V)二甲苯青 FF, 0.05% (W/V 溴酚蓝。10 mg/ml 溴化乙锭( EB)。 DNA Marker

4、。四、实验方法1. 基因组DNA抽提细胞采集：口腔拭子(消毒后的棉签) 擦拭两侧脸颊各 10 次，采集口腔粘膜脱落细胞， 将拭子转置于2mL离心管中，用剪刀将棉签部分剪下，加入DNAtt提试剂盒中的 400丄缓冲液GA注意：为了保证样本不被食物或者饮料污染， 取样前 30 分钟内请勿进食和饮水。dnA提取：参照试剂盒说明书操作。样品保存：DNA产物应保存在-20 C,以防DNA降解。下次实验再用。2. DNA浓度及纯度检测可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测 DNA样品的浓度与纯度。琼脂糖凝胶电泳法定性检测 DNA参照实验16 DNA琼脂糖电泳。紫外分光光度法定量检测DNA浓度及纯度参照实验

5、20动物肝脏DNA的提取和检测。测定浓度后，稀释至0.25ug/uL 备用。3. 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP分析查找基因序列选择你感兴趣的目的基因，首先查阅文献，如果已有报道并提供了该基因在Gen ba nk中的ID号，可直接在美国国立生物技术信息中心（Natio nal Center forBiotech no logy In formatio n）中搜索。登陆 http:/www. ncbi. nl m. ，先选择核酸数据库，点击下拉框选择Nucleotide，再把GenbankID号输入搜索框，点击Search，如（图25-1）：|Resonces

6、 HowTo-帥lir2ncbi*1 Dalaoase;工Nabnai Center foe0iote(jKi(Hogy 图25-1查找目的基因步骤 1如果只是知道基因的名字，贝U搜索框中输入基因名称，点击search。通常会产生大量的搜索结果，例如搜索人乙醛脱氢酶基因，search后进入如下界面-11(737： Tup OffHomt ScRaitus n(nanift mm（图25-2），共有700余条结果：2 NCBI ResourcesHewr To -Nucltotid*Nudeotide-LDH2Save search Limns AdvancedDisplay Setlmcis:

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8、58 1 Gl 195882443G豹E朗比FAST A Gf抽hi岱 P”Q胡尺亡燼刖电is图25-2查找目的基因步骤 2真核生物基因通常是断裂基因，含有大量间隔区，序列庞大，若查看全基因 序列，可点击 Geno mic,如果只想获取转录区，点击 Tran script 查看转录本， 点击后进入如下界面（图25-3）:3欢迎下载精品文档-h i hnyour r&nKtEUltB： 21 1.9356n linearAccion NM_0DlfO44S3 1 QI 5910003Ail 2Eatterte 0.il-.3DCiGt( rTRNi&M)旦?2_?第0常 划昶附辭：武9塑牡吩訂：

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12、亠 I - g 览境次303642465460667276肌眈品0206202632箕4450ES62Be74s086號attgget gee gctctcggtc gggccccgcc MG前举 glcigcagga. gctgagggg ciggtggatt lace acgga scegtgt ctggcceag cloaoegece a直CHttgtgc gaciagtg q耳匚agtaacc catgcg Sgccagtgct g.gacgga accgagcagg 包ug蓉g莓注*&匚 tact tdatcc： gagttetteg agagceaaca gccattcc ttit

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