药用大黄茎叶中有效成分的分析与测定毕业设计

1、201 1届毕业论文陕筋屋工摩院Shaanxi University 9坯）。甲醇：色谱纯 氯仿两种大黄分别购于汉中镇巴县清水白河两地2.1.3色谱条件色谱柱：应用 Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 250mm, 5ym),流动相为1%磷酸-99%甲醇，流 速为1.0mLmin，进样体积为10，柱温为30 C，检测波长为 254nm。(1) 流动相的选择本次研究选择大黄素为分析对象，这种大黄蒽醌类化合物均为极性化合物，固选择以甲醇为流动相，用微柱高效液相色谱进行分离。为了避免脱尾现象，所以在流动相中加入少量0.1%的磷酸调节，来抑制分析物的离解。实验表明：随着磷酸体积的增加各组分的

2、保留时间也增加，但对分离度 的影响不大。因此选择甲醇 :0.1%磷酸(80:20)作为流动相。(2) 波长的选择大黄中的蒽醌成分多属于大黄素型和茜草素型27，这两类蒽醌衍生物主要为三取代和四取代蒽醌28，研究表明用254nm为检测波长时曲线关系良好，因此选择波长为254nm，考虑到分析速度和分离度，流动相的流速为1.0Lmin。综合以上条件，本次试验选定的条件为色谱柱： 应用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 250mm ,5m) 流动相选择甲醇:0.1%磷酸比为80:20 ,流速为1.0mLmin，检测波长为254nm，进样体积10山，柱 温为30C。2.2实验方法2.2.1标准溶

3、液的配置准确称取大黄素标准品5.0mg，以色谱纯甲醇溶解定容至50mL的浓度分别为100冯mL的标准品储备液，进样前以纯甲醇稀释并用0.22针头过滤器过滤。2.2.2样品的配置在60犬C下干燥恒重并将大黄样品粉碎后过 200目筛，准确称取1g并加入50mL分析纯氯仿加 热回流120min，冷却，蒸干氯仿，用 20%硫酸溶解残渣，以色谱纯甲醇定容至 50mL，用0.22针头 过滤器过滤，即制得样品试液。2.3实验数据分析讨论在选定条件下，用所配置的大黄素标准品进行液相色谱，所得色谱图如图1所示，由图可见大黄素在6.5 min时达到了分离，随后的样品分析结果也表明所测定样品中各组分在此条件下均能实

4、2.3.1线性关系考察精密吸取混合标准品对照液5、10、15、20按上述色谱条件进行液相色谱测定峰面积（Y）,以峰面积分别对各进液量（X）回归，绘制标准曲线，得回归方程：大黄素A=3.3009X100C+14.298R2=0.9372 A表示峰面积 C表示各组分浓度（卩Lml）2.3.2精密度试验精密吸取上述对照品溶液 10微升，重复进样 5次，计算大黄素的峰面积平均值和RSD见表1表1名称大黄素峰面积平均值78.3836RSD1.9%2.3.3样品含量的测定表2样品中大黄素测定结果样品类型产地大黄素含量RSD大黄清水9.021.23白河9.741.542.3.4正交实验：以回流时间(A)、溶

5、剂用量(B)和溶剂(C为考查因素进行正交实验，实验条件如下表 表3序号条件AhBmLC氯仿：乙醇10.51001:021801:132501:2表4氯仿和乙醇混合溶剂提取结果分析AhBmL氯仿：乙醇大黄素g10.5501:29.33120.5801:19.32730.51001:09.32241501:09.32451801:29.422611001:19.34172501:19.45682801:09.238921001:29.721由表4可得最佳条件为 A ( 2h) B(100) C(氯仿比乙醇1:2)，在此条件下大黄素的分离效果最好3结论通过查阅资料，本文建立了一个通过高效液相色谱法同

6、时测定药用大黄中大黄素的方法，通过 实际样品的测定得出大黄素在6.5min时得到分离，与参考资料比较，实验结果比较接近，得到了预期的效果，验证了此方法的可行性。此方法具有快速、简单、灵敏度高等优点，可大黄中有效成分 的分析与测定提供一定的参考价值。参考文献1 中华人民共和国药典M .二部北京：化学工业出版社,2005:附录181- 182.2 陈发奎主编.常用中草药有效成分含量测定M .北京:人民卫生出版社1997:28-51.4倪弘，薛小平杨秀竹.大黄酸抑制小鼠腹腔巨噬细胞炎性介质活化的作用机理J.天津中医，2001,(01):35-36.6禹莉，凌云志顺铂.对肝癌细胞株HepG2增殖和SA

7、TB1表达的影响J.蚌埠医学院学报,2012,(8)7 范仁根，单湘湘，宋长志等.大黄素在体外诱导人肝癌细胞smmc-7721凋亡的实验研究J,河北医学,2008,(11).8 胡凯文候丽，陈信义等.大黄酸大黄素抗多药耐药肿瘤细胞研究J,中国中医基础医学杂志,1998,(11).10 纪松岗，柴逸峰.吴玉田等.分析化学J .1998, 26 (11) : 1388.11 苟奎斌,袁海龙,李仙义等 冲国药学杂志J ,1999, 34 (9) : 619.12 夏之宁，周闯，孙冠芸等.中成药J .1999, 21 (9): 478.26黎艳,张志玲，刘虎威等.第四届毛细管电泳十年发展学术会议论文集

8、C .200027 Thomson R H. Anthraquinones in: Naturallyoccurring quinines.2ad Ed. New York: AcademicPress lnc,1971.致谢：大学四年学习时光已经接近尾声，在此我想对我的母校，我的父母、亲人们，我的老师和同学 们表达我由衷的谢意。感谢我的家人对我大学四年学习的默默支持；感谢我的母校陕西理工学院给了我大学四年深造的机会，让我能继续学习和提高；感谢季晓晖、刘军海、李志洲等老师和同学们三年来的关心和鼓励。老师们课堂上的激情洋溢，课堂下的谆谆教诲；同学们在学习中的认真热情，生活上的热心主动，所有这些都让我的四年充满了感动。这次毕业论文设计我得到了很多老师和同学的 帮助，其中我的论文指导老师季晓晖老师对我的关心和支持尤为重要。每次遇到难题，我最先做得 就是向季晓晖老师寻求帮助，而季晓晖老师每次不管忙或闲，总会抽空来找我面谈，然后一起商量 解决的办法。我做毕业设计的每个阶段，从选题到查阅资料，论文提纲的确定，中期论文的修改，后期论文 格式调整等各个环节中都给予了我悉心的指导。这几个月以来，季晓晖老师不仅在学业上给我以精 心指导，同时还在