生物产品分析与检验ppt课件

1、生物产品分析与检验技术第一章 生物产品分析与检验根底知识 1.1常用玻璃器皿及仪器的运用 一、常用玻璃器皿的运用 1、容量瓶的运用 容量瓶是用来准确丈量包容液体体积的量器，他是细颈梨形平底玻璃瓶，由无色或棕色玻璃制成，带有磨口玻璃塞，颈上有一标线。有5、25、50、100、250、1000、2000ml等多种规格。用于直接配制规范溶液和规范稀释溶液。 容量瓶的容量定义为：在20时，充溢至刻度线所包容水的体积，以毫升计。调定弯液面的正确方法是：调理液面使刻度线的上边缘与弯液面的最低点程度相切，视野应在同一水平面。 运用容量瓶时应留意以下几点： 1、检查瓶口能否漏水： 加水至刻线，盖上瓶塞颠倒10

2、次每次颠倒过程中要停留在倒置外形l0s以后不应有水渗出可用滤纸片检查。 2.洗涤的方法普通是先用自来水洗涤，蒸馏水洗净后就可以了，污染严重的可用铬酸洗液洗涤，然后用自来水和纯水洗净。 3.用固体物质基准试剂或被测样品配制溶液时，然后用自来水和纯水洗净。应先在烧杯中将固体物质完全溶解后再转移至容量瓶中。 烧杯中的溶液倒尽后，烧杯不要直接分开搅棒，而应在烧杯扶正的同时使杯嘴沿搅棒上提12cm，随后烧杯再分开搅棒，这样可防止杯嘴与搅棒之间的一滴溶液流到烧杯外面。 然后再用少量水或其他溶剂测洗烧杯34次，每次用洗瓶或滴管冲洗杯壁和搅棒，按同样的方法移入瓶中。 当溶液达2/3容量时，应将容量瓶沿程度方向

3、悄然摆动几周以使溶液初步混匀。v再加水至刻线以下约1cm，等待12min；v最后用滴管从刻线以上1cm以内的一点沿颈壁渐渐加水至弯液面最低点与标线上边缘程度相切；v随即盖紧瓶塞，左手捏住瓶颈上端，食指压住瓶塞，右手三指托住瓶底，将容量瓶颠倒15次以上，每次颠倒时都应使瓶内气泡升到顶部；v倒置时应程度摇动几周，如此反复操作，可使瓶内溶液充分混匀。v100mL以下的容量瓶，可不用右手托瓶，一只手抓住瓶颈及瓶塞进展颠倒和摇动即可。v对玻璃有腐蚀作用的溶液，如强碱溶液，不能在容量瓶中久贮，配好后应立刻转移到其他容器如塑料试剂瓶中密闭存放。 不能在容量瓶里进展溶质的溶解 容量瓶不能进展加热，假设溶质在溶

4、解过程中放热，要待溶液冷却后在进展转移。 容量瓶只能用于配制溶液 容量瓶用毕及时洗涤干净，塞上瓶塞。 2、滴定管的运用 滴定管是滴定操作时准确丈量放出规范溶液体积的一种量器。管壁上有刻度线和数值，最小的刻度是0.1ml，0刻度在上，自上而下数值由小到大。滴定管根据外型有酸式滴定管和碱式滴定管2种。 酸式滴定管下端有玻璃旋塞，控制溶液的流出。盛装酸性溶液或氧化性溶液。 碱式滴定管下端连有一段橡皮管，管内有玻璃珠控制溶液的流出。盛装碱性溶液或非氧化性溶液。 1运用前的预备 新拿到一支滴定管，用前应先作一些初步检查，初步检查合格后，进展以下预备义务：洗涤涂凡士林检漏滴定剂溶液的参与 1洗涤 滴定管可

5、用自来水冲洗或用细长的刷子蘸洗衣粉液洗刷，但不能用去污粉，也不要用铁丝做的毛刷刷洗。 假设经过刷洗后内壁仍有油脂主要来自于旋塞光滑剂或其他能用铬酸洗液洗去的污垢，可用铬酸洗液荡洗或浸泡。 对于酸式滴定管，可直接在管中加人洗液浸泡，而碱式滴定管那么要先拔去乳胶管，换上一小段塞有短玻璃棒的橡皮管，然后用洗液浸泡。 无论用哪种方法洗，最后都要用自来水充分洗涤，继而用蒸馏水荡洗三次。 洗净的滴定管在水流去后内壁应均匀地润上一薄层水，假设管壁上还挂有水珠，阐明未洗净，必需重洗。 2涂凡士林 运用酸式滴定管时，为使旋塞旋转灵敏而又不致漏水，普通需将旋塞涂一薄层凡士林。 3检漏 检漏的方法是将滴定管用水充溢

6、至“0,刻度附近，然后夹在滴定管夹上，用吸水纸将滴定管外擦干，静置1min，检查管尖或旋塞周围有无水渗出，然后将旋塞转动180，重新检查。如有漏水，必需重新涂油。 4装溶液参与滴定剂溶液前，先用蒸馏水荡洗滴定管三次，每次约10mL。荡洗时，两手平端滴定管，渐渐旋转，让水普及全管内壁，然后从两端放出。再用待装溶液荡洗三次，用量依次为10、5、5 mL.荡洗方法与用蒸馏水荡洗时一样。 荡洗终了，装人滴定液至“0刻度以上，检查旋塞附近或橡皮管内及管端有无气泡。如有气泡，应将其排出。排出气泡时，对酸式滴定管是用右手拿住滴定管使它倾斜约30，左手迅速翻开旋塞，使溶液冲下将气泡赶掉；对碱式滴定管可将橡皮管

7、向上弯曲，捏住玻璃珠的右上方，气泡即被溶液压出。 2滴定滴定管应垂直地夹在滴定管应垂直地夹在滴定管架上。运用酸式滴定管滴定时，左手无名指和小指弯向手心，用其他三指控制旋塞旋转不要将旋塞向外顶，也不要太向里紧扣，以免使旋塞转动不灵。v运用碱式滴定管时，左手无名指和中指夹住尖嘴，拇指与食指向侧面挤压玻璃珠所在部位稍上处的乳胶管，使溶液从缝隙处流出。v但要留意不能使玻璃珠上下挪动，更不能捏玻璃珠下部的乳胶管。v必需掌握三种加液方法：v逐滴滴加；加1滴；加半滴。v滴定操作普通在锥形瓶内进展 ；v在锥形瓶中进展滴定时，右手前三指拿住瓶颈，瓶底离瓷板约23 cm.将滴定管下端伸人瓶口约1 cm。左手如前述

8、方法操作滴定管，边摇动锥形瓶，边滴加溶液。 3滴定时留意的事项摇瓶时，转动腕关节，使溶液向同一方向旋转左旋、右旋均可，但勿使瓶口接触滴定管出口尖嘴。滴定时，左手不能分开旋塞任其自流。眼睛应留意察看溶液颜色的变化，而不要凝视滴定管的v溶液应逐滴滴加，不要流成直线。接近终点时，应每加1滴，摇几下，直至加半滴使溶液出现明显的颜色变化。加半滴溶液的方法是先使溶液悬挂在出口尖嘴上，以锥形瓶口内壁接触液滴，再用少量蒸馏水吹洗瓶壁。v用碱式滴定管滴加半滴溶液时，应放开食指与拇指，使悬挂的半滴溶液靠入瓶口内，再放开无名指与中指。v每次滴定应从“0分度开场假设在烧杯中进展滴定，烧杯应放在白瓷板上，将滴定管出口尖

9、嘴伸入烧杯约1 cm。滴定管应放在左后方，但不要靠杯壁，右手持玻棒搅动溶液。加半滴溶液时，用玻棒末端承接悬挂的半滴溶液，放入溶液中搅拌。留意玻棒只能接触液滴，不能接触管尖。滴定终了后，弃去滴定管内剩余的溶液，随即洗净滴定管，并用水充溢滴定管，以备下次再用。 4读数读数时，可将滴定管夹在滴定管架上，也可以右手指夹持滴定管上部无刻度处。不论用哪一种方法读数，均应使滴定管坚持垂直外形。读数时，视野应与液面成程度。视野高于液面，读数将偏低；反之，读数偏高。v对于无色或淡色溶液，应该读取弯月面下缘的最低点。溶液颜色太深而不能察看到弯月面时，可读两侧最高点。初读数与终读数应取同一规范。v读数应估计到最小分

10、度的1/10。对于常量滴定管，读到小数后第二位，即估计到0.01mL。 三、移液管的运用移液管是用于准确移取一定体积溶液的量出式玻璃量器，正规称号是“单标线吸量管，习惯称为移液管。它的中间有一膨大部分，管颈上部刻有一标线，用来控制所汲取溶液的体积。移液管的容积单位为毫升mL，其容量为在20时按规定方式排空后所流出纯水的体积。 1运用前的预备 用洗净并烘干的小烧杯倒出一部分欲移取的溶液，用移液管汲取溶液510mL，立刻用右手食指按住管口尽量勿使溶液回流，以免稀释，将管横过来，用两手的拇指及食指分别拿住移液管的两端，转动移液管并使溶液布满全管内壁，当溶液流至距上口23cm时，将管直立，使溶液由尖嘴

11、流液口放出，弃去。 2汲取溶液 用移液管自容量瓶中移取溶液时，右手拇指及中指拿住管颈刻线以上的地方后面二指依次靠拢中指，将移液管插入容量瓶内液面以下12cm深度。不要插入太深，以免外壁沾带溶液过多；也不要插人太浅，以免液面下降时吸空。左手拿洗耳球，排除空气后紧按在移液管口上，借吸力使液面渐渐上升，移液管应随容量瓶中液面的下降而下降。v当管中液面上升至刻线以上时，迅速用右手食指堵住管口食指最好是潮而不湿，用滤纸擦去管尖外部的溶液，将移液管的流液口靠着容量瓶颈的内壁，左手拿容量瓶，并使其倾斜30o。v稍松食指，用拇指及中指悄然捻转管身，使液面缓慢下降，直到调定零点。按紧食指，使溶液不再流出，将移液

12、管移入预备接受溶液的容器中，仍使其流液口接触倾斜的器壁。松开食指，使溶液自在地沿壁流下，待下降的液面静止后，再等待15s，然后拿出移液管。 留意的事项：在调整零点和排放溶液过程中，移液管都要坚持垂直，其流液口要接触倾斜的器壁不可接触下面的溶液并坚持不动；等待15s后，流液口内残留的一点溶液绝对不可用外力使其被震出或吹出；移液管用完应放在管架上，不要随意放在实验台上，尤其要防止管颈下端被沾污。二、常用的仪器设备 1、培育箱 为方形或长形箱，以铁皮喷漆制成外壳，铅板做内壁，夹层充以石棉或玻璃棉等绝缘资料以防温度的分散，内层底下安装电阻丝以加热，利用空气对流，使箱内温度均匀。箱门双重，内有玻璃门，便

13、于察看箱内标本，外为金属门。 2操作方法与维护 1先关箱门，接通电源。 (2)箱内不应该放过热过冷之物，取放物品，应随手封锁箱门，维持恒温。 3箱内可经常放入装水容器一只，维持箱内温度和减少培育物中的水分大量蒸发。 4培育箱最底层温度较高，培育物不宜与之接触 5定期消毒箱内，可每月一次。 2、超净义务台 是一种部分层流安装，能在部分呵斥高干净度的环境。应留意的事项： 1超净台用三相四线380v电源。 2运用前30min翻开紫外灯 3运用前10min将通风机启动。 4操作时把开关按钮拔在照明处 5操作区为层流区，物品放置不应妨碍气流正常流动 6操作者应穿干净义务服，义务鞋，戴好口罩。 7义务终了

14、后停顿风机运转，把防尘帘放下。 8运用过程中发现问题立刻切断电源，保修缮人员。 9安装的地方远离有振动及噪声大的地方，以防止振动对它的影响 10每36个月检查一下义务台的性能有无变化 11搬运要小心。 3、显微镜 1光学显微镜的构造1光学部分 目镜(接目镜)物镜(接物镜)“5，“10的含义。低倍镜 (8x，10 x)：0.25,160高倍镜 (40 x,45x):0.65,160/0.17油 镜 (90 x,100 x):1.25,160/0.17 集光器 位于载物台下方，可上下挪动，起调理和集中光线的作用。 反光镜 装在显微镜下方，有平凹两面，可自在转动方向，将最正确的光线反射至集光器。 机

15、械部分调焦器镜筒物镜转换器载物台推片器与游标卡尺镜座镜柱活动关节镜臂普通生物显微镜显微图象系统生物显微镜(含摄影系统)数码生物显微镜 2义务原理 普通的光学显微镜利用目镜和物镜2组透镜系统放大成像，普通微生物学运用的显微镜有3个物镜，其中油镜对微生物的研讨最为重要。 3实验程序安排 调光源 调目镜 调聚光器 低倍镜 高倍镜 油镜 擦镜 复原。 4显微镜的运用 1察看前的预备 显微镜的安排 距实验台边缘10cm左右。 光源调理 安装在镜内的光源可经过调理电压获得适当的亮度，假设运用反光镜采集自然光可运用平面或凹面反光镜。 双筒显微镜的运用 根据个人情况，目镜间距可以调整，左目镜上普通配有屈光光度

16、调节环，可以顺应眼距不同或两眼视力有差别的不同察看者。 聚光器数值孔径值的调理 聚光镜主要参数就是数值孔径，有一定的可变范围，普通聚光镜边框上的数字代表她的最大数值孔径，通过调理聚光镜下面可变光阑的开放程度，可以得到各种不同数值孔径，以顺应不同物镜的需要。 2显微镜 低倍镜 高倍镜 油镜察看 3显微镜的处置及维护 上升镜筒，取下载玻片 运用时要非常顾惜，各部位不要随意拆卸，搬动显微镜时应一手托镜座，一手握镜壁，放于胸前以免损坏。 显微镜放置的地方要枯燥，以免镜片生霉，防止灰尘，在箱外放置不用时要用纱布等盖住镜体防止阳光直射远离热源。 4、高压蒸汽灭菌锅 可用于培育基、生理盐水、废弃的培育物以及

17、耐高温药品、纱布、剥离等灭菌。 1构造 2操作应留意 (1)先加适量水 2将待灭菌的物品放入到锅里 3翻开放气阀，放气35min，然后封锁放气阀，控制温度 4待压力降到0时翻开放气阀 5灭菌终了，翻开水阀门，排进锅内剩水。3灭菌义务外形检验方法1化学检验法 2温度计检查法第二节 溶液的配制 一、溶液浓度的表示方法1、物质的量浓度 指单位体积溶液中所含溶质的物质的量。每升溶液中所含溶质B的物质的量，称为B的物质的量浓度，简称浓度，以B表示或以方括号 表示，常用单位为molL1。过去习惯称该浓度为体积摩尔浓度。 CB=nB/V2、物质的质量分数单位质量的溶液中所含溶质B的质量，或者说混合物中某一组

18、分B的质量与各组分质量之和的比。WB=mB/m3、滴定度滴定度是指1 mL规范溶液A又称滴定剂相当于被测组分B的质量，用符号TB/A表示： TB/A = mB / VA式中：mB为被测组分质量；VA为规范溶液的体积。式中：mB为被测组分质量；VA为规范溶液的体积。TB/A的常用单位为gmL1。二、溶液的配制1、普通溶液的配制要求不是很准确，配制时用托盘天平称量，用量筒，量杯或烧杯量取，试剂溶解时有放热景象或以加热溶解时，应待冷却后再转入试剂瓶中。 应留意的问题1、用易水解的盐配制溶液时，需参与适量酸后，再加水或稀酸稀释。2、易腐蚀剥离的溶液，不能盛装在玻璃瓶中3、配制指示剂溶液时，用分析天平。

19、4、经常运用的溶液，可配置成运用浓度是10倍的贮藏液。2、规范溶液的配制方法1直接配置法适宜于基准物质配制规范溶液具备条件：1试剂的纯度高2物质的组成与化学式相符，3试剂稳定4摩尔质量尽可以大 2间接配制法先配制近似浓度的溶液在标定的方法3、规范溶液的配制与标定的本卷须知1配制用水要是蒸馏水或是离子交换水。2义务中运用的天平砝码，滴定管容量瓶及移液管需呀校正。3假设规定要用标定和比较2中方法测定时，不要略去任何一种误差不得大于0.2%4规范溶液规定为20标定之浓度为准5标定时所用基准试剂应符合要求-化学试剂分析纯级。6配制规范溶液浓度与规定浓度误差不得大于5%第三节培育基的配制 以人工方法配制

20、成的适宜微生物生长繁衍或积累代谢产物的营养基质，称为培育基。 含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素、水分等还具有适宜pH、一定的缓冲能力、一定的氧化复原电位及适宜的浸透压。一、培育基的种类按物理外形分为固体、半固体、液体培育基；按组成成分分为天然、合成、半合成培育基；按作用分为根底、加富、选择、鉴别、厌氧及活体培养基。1、根底培育基 根本营养成分2、加富培育基 在根底培育基汇总再参与葡萄糖、血糖、血清等物质。3、选择培育基 根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理化学条件的抗性二设计的培育基。4、鉴别培育基 在培育基中参与某种试剂或化学药品，使培养后发生某种变化从而鉴别不同种

21、类的微生物5、厌氧培育基 将培育基与环境中空气隔绝，或降低培育基中氧化复原电势。 6、活体培育基二、主要成分1、营养物质 蛋白胨、肉浸汁、牛肉膏、糖类、血液、鸡蛋、动物血清、生长因子、无机盐类。2、水分3、凝固物质 琼脂、明胶、卵蛋白、血清4、抑制物5、指示剂三、培育基的制备1、称量药品2、溶解3、调pH4、融化琼脂5、过滤分装6、包扎标志7、灭菌第四节 无菌操作一消毒与灭菌1、消毒 用物理、化学或生物学方法杀死病原微生物称为消毒。只对细菌的繁衍体有效，对于细菌芽孢无效。2、灭菌 杀灭物体中或物体上说有微生物的繁衍体和芽孢的过程称为灭菌。有物理灭菌法和化学灭菌法。3、防腐 防止或抑制微生物生长

22、繁衍的方法称为防腐。某些药剂在低浓度时是防腐剂高浓度时是消毒剂。4、无菌及无菌操作无菌是指物体中没有活的微生物存在。防止微生物进入人体或物体的操作方法称为无菌及说或无菌操作。二、常用的灭菌方法1、加热灭菌 是经过加热高温使菌体内蛋白量变性凝固，酶失活从而到达杀菌目的。1干热灭菌法 经过运用干热空气杀灭微生物的方法教干热灭菌法。1602h用于玻璃仪器、金属器皿的灭菌。 1灭菌前的预备 玻璃仪器要进展正确包裹和加塞。 2枯燥箱灭菌 物品不要摆放太密，不能和烘箱的内层底板直接接触，温度不要超越170，假设是烘烤玻璃仪器温度为12030min即可，温度降至5060才可翻开箱门。此法不能用油蜡质包扎物品

23、。2湿热灭菌法A、巴氏消毒法 B、煮沸消毒法C、间歇灭菌法D高压蒸汽灭菌法2、过滤除菌法3、紫外线杀菌法 杀菌最强的波段在240300nm以253.7nm最强，与DNA吸收光谱范围有一致，紫外线的穿透才干不强，。四、影响灭菌与消毒的要素1、不同的微生物对热的抵抗力和消毒剂的敏感性不同。2、灭菌处置剂量对微生物的影响3、微生物污染程度对灭菌的影响4、温度的影响5、湿度的影响6、酸碱度的影响 7、介质对灭菌的影响 8、穿透条件的影响9、氧的影响五、微生物的接种和培育 将微生物的纯种或含有微生物的资料转移到培育基上的过程叫微生物接种。微生物培育：经微生物接种后的培育基被放置在一定环境条件下，使微生物

24、在培育基上生长繁衍。 1、微生物接种方法1涂布法2划线法3、倾注法4、点值法5、穿刺法6、浸洗法7、活体接种 用于病毒培育2、微生物的培育1需氧培育2厌氧培育第五节 生物产品分析的根本方法 物理分析法 有密度法和旋光法方法 化学分析法 容量分析法和称量法 仪器分析法 一、滴定分析法1、滴定分析法原理是将一种知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质中，直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反响为止，根据试剂溶液的浓度和耗费的体积，计算被测物质的含量。 将滴定溶液从滴定管中加到被测物质中的过程叫做滴定。适宜滴定分析的化学反响具备条件：1反响必需按方程式定量地完成，要求在99.9%以上2反响可以迅速地完

25、成。3共存物质不干扰主要反响或可用适当的方法消除其干扰4有比较简便的方法确定化学计量点。 2、滴定分析法的分类1直接滴定法2返滴定法3置换滴定法4间接滴定法 根据所利用的化学反响类型不同，滴定分析法可以分为：1酸碱滴定法2氧化复原滴定法1高锰酸钾法 是氧化剂，其氧化才干和溶液的酸度有关。 在强酸溶液中能获得5个电子，在微酸、中性、或弱碱性溶液中获3个电子有MnO2生成在强碱中获得一个电子，故应该在强酸中滴定，用硫酸控制酸度，尽量防止用盐酸不用硝酸。高锰酸钾的优点：氧化才干强，运用广泛不需要另加指示剂。缺陷：试剂中含有少量杂质，溶液不够稳定，能与许多复原性物质发生反应，干扰景象严重。2重铬酸钾法

26、 利用他在强酸性溶液中的强氧化性的氧化复原滴定法。在酸性溶液中Cr2O7 2-获得6个电子被复原Cr3+ 优点：易提纯，是基准物质，可用直接法配制溶液 溶液非常稳定，可长期保管 。 对应电对的规范电极电位比高锰酸钾的小，可在盐酸中测定铁。 运用广泛，可直接、间接测定许多物质。缺陷：反响速度慢，条件难以控制，需外加指示剂，另外重铬酸钾有毒，运用时留意废液的处置，以免污染环境。3碘量法 利用I2的氧化性和I-的复原性的氧化复原滴定法，即可测定复原性物质也可测定氧化性物质，还可测定一些非氧化复原性物质。根据所用的规范溶液的不同可分为直接碘量法和间接碘量法。 直接碘量法以I2溶液为规范溶液可测定电极电

27、位较小的复原性物质。间接碘量法以Na2S2O3为规范溶液间接测定氧化性物质。以淀粉为指示剂碘遇淀粉显蓝与温度，酸度I-亲密相关。 3配位滴定法4沉淀滴定法 以沉淀溶解平衡为根底确实定分析法1莫尔法 以铬酸为指示剂，在中性或弱酸性溶液中，用AgNO3标定溶液直接滴定Cl-或Br-。 Ag+Cl- AgCl 白色 2Ag+CrO42- Ag+CrO4 (砖红色 2佛尔哈德法 用铁铵矾为指示剂的银量法。直接滴定法 Ag+SCN- AgSCN 白色Fe3+ SCN - 【FeSCN】2+血红色返滴定法在含有卤素离子的硝酸溶液中，参与一定量过量的AgNO3以铁铵矾做指示剂，用NH4SCN为规范溶液饭滴定过量的AgNO3。3法扬司法 用吸附指示剂指示终点的银量法称为法扬司法。吸附指示剂是一些有机燃料。3、滴定分析中的计算滴定分析计算是以化学反响中各物质的量之间的关系为根底的，因此规范溶液与被测物质在反响中的化学计量关系是处置一些列滴定分析计算的关键 Aa+bB Gg+hH nA:nB=a：b n