生物技术药物的药代动力学特点及检测

1、Selected Blockbuster Protein Pharmaceuticalsl吸收l分布l代谢与排泄l非肠道给药( Parenteral Route)：IVMSCIP鼻腔肺直肠回肠阴道颊口服l鼻腔给药(Intranasal );l口服给药(Oral )l经皮给药(Transdermal );l其他给药途径: 结肠、回肠、子宫、阴道、颊、眼睛等。Pharmacokinetics of IM ADI-SS PEG 20,000 mw in humans with hepatocellular carcinomal易给药；鼻粘膜上皮细胞有大量的微绒毛和广泛分布的血管淋巴管；无肝首过效应；

2、l伪首过效应(Pseudofirstpass effect)；多肽、蛋白酶（主要是氨肽酶）；lcalcitonin, oxytoxin, LH-RH, growth hormone, interferone, vaccines；l分子量up to 2 KDa: pharmacologically acitive；l血脑屏障：IGF-1。Oral administrationl缺乏特异转运系统；l存在蛋白分解酶；l外排作用泵l提高对蛋白多肽类药物摄取的方法：l脂质体l鼻腔给药；l脊髓管灌注或泵连续输注。lDrug biotransformation is divided into two typ

3、es of reactions: lphase I (hydrolysis, oxidation, and reduction)lphase II reactions: conjugation (uridine diphosphoglucuronosyl transferase (UGT), N-acetyl transferase (NAT), glutathione S-transferase (GST), and sulfotransferase (ST).l生物活性不仅取决于药物的一级结构,而且与其二级、三级结构有关：生物检定法；生物检定法；生物PD-PK模型l免疫测定法 (l酶联免疫

4、吸附测定法 (l放射免疫测定法 (l免疫放射定量法 l同位素标记示踪法 (l生物检定法 (l高度的灵敏度: ngpg/ml;l较高的特异性;l易于操作、快速、不使用同位素、无辐射源,适用于批处理;l试剂使用寿命长；l目前最常用的检测方法。l缺点l待测蛋白多肽的免疫活性而非生物活性;l不能区别具有抗原决定族的代谢物片断；l不能同时测定代谢物片断; l不同来源抗体结合性不一；l受一些因素的干扰干扰因素l具有抗原决定族的代谢物片断；l长期给药；l生物等量性实验Immunogenicity of native ADI and ADI-SS PEG in mice and rabbits 普通ELISA

5、 、高灵敏度ELISA（additional 增色放大系统）和化学发光ELISA 法(luminol/过氧化氢底物)灵敏度和线性范围比较 (From 汤仲明，2002）放射免疫测定法和免疫放射定量法免疫放射定量法l需同位素l常用于激素浓度测定同位素标记示踪法同位素标记示踪法l在目标蛋白多肽分子上标记同位素,从而鉴别目标蛋白多肽与内源性蛋白多肽l该法需将目标蛋白多肽进行同位素标记,标记方法有外标法(化学联接法) 和内标法(掺入法) 2 种；l外标法：将标记物如125 I 通过化学方法偶联至完整蛋白中如蛋白中酪氨酸或赖氨酸等，常用的化学方法有氯胺T 或Iodogen法l内标法：可用即将标记以3H

6、,14C 或35S 等同位素的氨基酸加入生长细胞或合成体系中,从而获得含同位素的蛋白多肽分子,但因其操作复杂而少用；l标记后蛋白多肽表征：l比放射性l放射性纯度l标记的蛋白多肽的生物活性。同位素标记示踪法同位素标记示踪法l缺点l同位素标记l一般不能进行人体药物动力学研究;l可能引起药物的生物活性及代谢行为发生变化；l由于蛋白多肽进入体内会被降解代谢,或标记氨基酸的生物再利用，或与其它蛋白质结合,总的放射性不能代表药物动力学过程同位素标记示踪法同位素标记示踪法与其他分析手段联合应用l三氯醋酸(TCA) 沉淀法lHPLC 法生物检定法生物检定法l利用被测蛋白多肽类药物某种特异生物反应,通过剂量(浓

7、度)效应曲线对目标蛋白多肽进行定量测定的一种分析方法；l分为离体分析法和在体分析法；l离体分析法通常采用细胞体外培养技术,以细胞的增殖、分化或细胞毒性为基础,以细胞数目的增减等为量效指标，如水蛭素(hirudin) 凝血酶时间测定；l在体分析法则利用蛋白多肽类药物在整体动物中引起的特异生物学反应，如胰岛素降底小鼠血糖。Pharmacokinetic analyses of ADISS PEG and ADISS PEG measured by enzyme and ELISA assays生物检定法生物检定法缺点l缺乏特异性,不能定量其代谢产物,不能区分内源性和外源性细胞因子;l灵敏度差,为启

8、动生物过程细胞因子的浓度必须在阈水平以上,低于阈水平的样品将不能被定量,从而降低了方法的灵敏度;l耗时,为完成分析需时间较长,往往达数日或数周；l重复性差,不同实验室的结果有很大差异性,致不同单位之间的比较难以进行;Pharmacokinetic profiles for interferon (IFN)-2a and 40 kDa polyethylene glycol (PEG)IFN-IV or SC albutropin（growth hormonealbumin fusion）or GH in rats and monkeysl非肠道给药( Parenteral Route)：IVM

9、SCIP鼻腔肺直肠回肠阴道颊口服l鼻腔给药(Intranasal );l口服给药(Oral )l经皮给药(Transdermal );l其他给药途径: 结肠、回肠、子宫、阴道、颊、眼睛等。l缺乏特异转运系统；l存在蛋白分解酶；l外排作用泵l提高对蛋白多肽类药物摄取的方法：l脂质体l鼻腔给药；l脊髓管灌注或泵连续输注。Immunogenicity of native ADI and ADI-SS PEG in mice and rabbits 同位素标记示踪法同位素标记示踪法l在目标蛋白多肽分子上标记同位素,从而鉴别目标蛋白多肽与内源性蛋白多肽l该法需将目标蛋白多肽进行同位素标记,标记方法有外标法(化学联接法) 和内标法(掺入法) 2 种；l外标法：将标记物如125 I 通过化学方法偶联至完整蛋白