微生物除去实验方法20151015

1、空气净化器对微生物去除的试验方法1.试验原理空气净化器机器内的微风扇使室内空气循环流动，污染的空气通过机内的空气过滤器后将各种污染物清除或吸附，再经过装在出风口的负离子发生器，将空气不断电离，产生大量负离子，被微风扇送出，形成负离子气流，达到清洁、净化空气的目的。此处采用对照试验，分别对两组完全相同环境的气雾舱和细菌浓度进行有空气净化器净化作用和无净化状态下进行对比实验，得出空气净化器对微生物去除效率。2.试验的一般条件2.1模拟试验舱：2.11试验舱的温度为2025，相对湿度为RH50%-70%；2.12试验舱一般要求：采用相邻的一对气雾舱，两者所处环境(包含温度、湿度、洁净度、光照、密封性

2、、通风条件等)应一致，并在实验过程中保持稳定。试验舱设计和结构应保证舱内微生物气体不外泄，所用材料应耐腐蚀、易清洗；2.13试验舱容积:（3. 5 mX3. 4 mX2. 5 m=30 m3）；2.14围护结构(包括壁面、顶棚、地面):应采用低污染或无污染且低吸附率的材料(如不锈钢、聚四氟乙烯、钢化玻璃等)；2.15密封填缝材料：用硅橡胶条及玻璃密封胶；2.16空气搅拌装置：小吊扇；2.17空气循环系统:试验舱内设独立的空气循环系统，经过滤净化后舱内空气洁净度应达到万级以上，实验开始前通过自动控制阀使试验舱完全密闭，试验舱外操作间应保持正压，防止微生物气溶胶外泄。2.2试验机组的安装：两个舱里

3、面都放一台相同型号、同批次的产品，将对照试验舱空气净化器所有具有除菌、杀菌功能的零部件拆除或者将除菌、杀菌功能设定为不工作状态。2.3白色葡萄球菌菌悬液菌悬液的制备：按照消毒技术规范（2002）2.1.1.2进行制备。2.4 试验的大致所需时间：见附表二3.试验的设备撞击式空气微生物采样器：对空气中细菌的捕获率大于95%喷雾染菌装置(气溶胶喷雾器)：喷出的气溶胶微粒的直径90%以上应小于10 um高压蒸汽灭菌器恒温培养箱干热灭菌器高效滤器颗粒计数器（稀释器）温湿计空气压力计冷藏箱气雾舱（试验舱）抽风机紫光灯小吊扇硅橡胶条玻璃密封胶钢化玻璃菌落计数器4实验材料牛肉膏 10.0g蛋白胨 20.0g

4、氯化钠 10.0g琼脂 15.0g蒸馏水 2000ml白色葡萄球菌菌悬液5.试验步骤5.1灭菌：用高压蒸汽灭菌器对试验中要用到的试验器皿进行灭菌，时间大约1h。（采样器、冷藏箱、小吊扇、空气压力计、抽风机等） 5.2通过高效过滤器对气雾舱空气进行净化除菌，约0.5h，使其洁净度不低于7级（万级）【1】 5.3调节气雾舱的温度和相对湿度，约20min，维持稳定一段时间后，10min，(以保证整个实验过程中温度和相对湿度相对恒定)气雾舱密闭，整个试验中不得再次打开。 5.4打开操作间的送风装置，约0.5h，送入经过高效过滤器的循环风以维持操作间的空气压力为正压（15 Pa-30 Pa），防止试验舱

5、中的微生物气溶胶外泄。 5.5取试验菌悬液，用营养肉汤培养基【2】稀释成所需浓度（需验证）。按照喷雾染菌装置设定的压力、气体流量及喷雾时间喷雾染菌，约5min，要求边喷雾，边用空气搅拌设备（如小吊扇）搅拌。喷雾染菌完毕，要求继续搅拌10 min，然后静置15 min。 5.6 同时对试验组和对照组气雾室分别进行运行前细菌浓度采样，采样时间为1 min-5 min，采样时采样头应向上方。要求气雾室内空气中各阳性对照菌数应为5.0104CFU/m3-5.0105CFU/m3，（此处需要实验验证来确定菌落数的多少和步骤5中喷雾时间的长短）否则试验无效。 5.7运转被测样机至厂家规定的最高除菌条件状态

6、（如厂家没有规定，以最高风速、最大出风状态为准）。对于空调器产品，根据送风状态进行测试。 5.8测试时间计算：T=2500V/(152.7N) T-测试时间（h）,N-空气净化器功率（W）V-气雾室容积（m3）测试时间最少不短于15 min，最长不超过2h。根据测试时间长短，设置2-3个采样时间点。 5.9被测样机运行到规定测试时间后，对试验组和对照组气雾室同时进行采样，采样时间为1 min-5 min，采样时采样头应向上方。采样过程中被测样机应停止运行。 5.10在室温状态下，采样营养琼脂【3】平板必须于采样后尽快放入36士1培养箱中培养24h-48h，然后计数生长菌落数(换算成CFU/m3

7、，单位)，换算公式如式：空气含菌量（CFU/m3）=采样平板上总菌落数（CFU）/采样流量（L/min）采样时间（min）1000注：未用的同批培养基应各取1份-2份，与试验采样的样本同时进行培养，作为阴性对照。阴性对照组不得出现细菌生长，否则说明培养基有污染，试验无效，应取无污染的培养基重新进行测试。 5.11试验完毕后，对气雾舱空气做最终消毒。打开紫外灯，消毒lh-2h后，开启抽风机，过滤除菌。 5.12试验应重复进行测试3次（每次试验间隔至少ld），分别计算除菌率（取3次试验结果的算术平均值为最后的试验结果）。 5.13试验数据处理，得出试验结论自然消亡率=（对照组初始时菌落数-对照组结

8、束时菌落数）/对照组初始时菌落数100%抗菌（除菌率）=实验组初始时菌落数（1-自然消亡率）-实验组结束时菌落数/实验组初始时菌落数（1-自然消亡率）100%6.试验结论 除菌率大于自然消亡率，则说明空气净化器有除菌作用，除菌率与自然消亡率差距越大，表示该空气净化器除菌效果明显；若除菌率几乎等于自然消亡率，则说明该空气净化器除菌效果不明显。【1】7级（万级）表示空气中悬浮粒子粒径的最大上限为：0.5um粒径粒子数为352000pc/m3,1um粒径粒子数为83200 pc/m3，5um粒径粒子数为2930 pc/m3。【2】营养肉汤培养基：取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，蒸

9、馏水1000ml，将所有溶于蒸馏水中，调PH为7.2-7.4，分装，于121度蒸汽灭菌20min备用。【3】琼脂培养基：取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000ml，除琼脂外其他都溶于蒸馏水中，调PH为7.2-7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121度蒸汽灭菌20min备用。附件一附件二 FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器 温湿度/风速/风压技术参数原理：撞击法捕获率：98%采样流量：28.3L/min电源：AC220V 35W尺寸：撞击器108192mm主机200150125mm重量：4kg附件三 喷雾染菌装置(气溶胶喷雾器)主要参数粒谱直径

10、1 号喷嘴：10 5um, 用 于 吸 入 治 疗 和 免 疫 给药2 号喷嘴：20 10um, 用 于 空 气 消 毒3 号喷嘴：5 0 1 0 u m , 用 于 表 面 消 毒4 号喷嘴：1 0 0 1 0 u m , 用 于 表 面 消 毒喷雾时间：1 号喷嘴约 30 m i n / L2 号喷嘴约 20 m i n / L3 号喷嘴约 10 m i n / L4 号喷嘴约 5 m i n / L药液容量A 型1.5LB 、 C 型2.0LA 型制冷最低温度10 静风喷雾射程 6 m工作温度( 0 40 ) 主机尺寸 W D H( 520 142 230 ) mm仪器噪声 80dB(A

11、)整机重量约 3.5kg工作电源AC220V 10% ， 50Hz功耗 1000 W附件四 高压蒸汽灭菌器高压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的原理。步骤：1. 首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。2.放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的

12、排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。4.用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。5.灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。6.将取出的灭菌培养基放入 37温箱培养24小时，

13、经检查若无杂菌生长，即可待用。附表一 试验器材一览表序号产品图片产品名称/型号产品简单介绍1MOV-211S三洋干热灭菌器/2恒温培养箱温控范围:室温 560温度波动: 大不于0.5温度均匀性: 1工作电源:交流220V, 50HZ3高效滤器高效过滤器主要用于捕集0.5um以下的颗粒灰尘及各种悬浮物。采用超细玻璃纤维纸作滤料，胶版纸、铝膜等材料作分割板，与木框铝合金胶合而成。4温湿计温度范围0-50湿度范围0%-100%5冷藏箱密封性好可以进行消毒、杀菌6抽风机/7紫光灯用来消毒、杀菌8硅橡胶条/9小吊扇/10菌落计数器将计数笔连接到计数器主机上，把培养皿放在白光板上，打开白光灯和显示屏电源，用计数笔触动(力量大小以显示屏能计数为准)培养皿中的菌落，LED显示屏显示所点过的细菌数量；计数完成可用计数笔在稿纸上暂记总数，重新快关显示屏电源，LED显示屏自动归零，二次计数与稿纸上一次总数比较，数量相同可得较准确的结果。本仪器配有减数系统,若不慎误点菌落,计数多出，可利用减数按键向下减数以恢复正常的计数值11LZJ