试验七枯草芽孢杆菌最适生长条件的研究

1、实验七枯草芽孢杆菌最适生长条件的研究一、实验原理采用正交设计法，选择培养基浓度、培养温度、PH等四个因素的三个水平来设计实验，并采用极差法分析实验结果，得出枯草芽孢杆菌的最适生长条件。本实验不考虑四种因素之间的相互影响。实验材料1、菌种：枯草芽孢杆菌48小时培养液100ml;2、器材：恒温培养箱(20C、30 C、40C各一)；电子天平(感量为0.01g ); PH计；2000W电炉、量筒、烧杯、漏斗、玻璃棒、刀、不锈钢锅、高压蒸汽灭菌锅、250ml三角瓶20个、5ml吸管48支；3、药品：蛋白胨；酵母膏；NaCI;蒸馏水；NaOH( 1mol/L )、HCl (1mol/L )实验步骤1、实

2、验设计(1) 确定实验因素和水平数：根据实验的目的确定实验要研究的因素。 如果对研究的问题了解较少， 可多取一些实验 因素；若反之可抓住主要因素研究。 因素确定后，就要选择测试水平， 每个因素的水平数可 以相等，也可以不等，重要因素或特别希望了解的因素水平数可以多一些。选择LB培养基中蛋白胨与酵母膏的浓度、培养基PH值以及培养温度等三个因素为优化对象，设计三个测试水平，因此可以选用L9 ( 34)正交表，若考虑交互作用则应选择 L27( 313) 正交表。本实验不考虑交互作用，选择L9 (34)正交表即可。(2) 正交表的选择列号实验号 1234结果1111121222313334212352

3、23162312731328321393321(3) 表头设计所谓表头设计，就是把实验中挑选的各个因素，填写在正交表的表头各列。 不考虑交互作用时，因素的排列顺序可任意放置，只要每一因素占一列即可；若要考虑交互作用时，则应按照指定的列安排，不能任意放置。本实验不考虑交互作用，可任意排列。枯草芽孢杆菌最适生长条件的研究表头设计：因素水平LB温度PH12350%100%150%20 C30 C40 C369(4) 实验安排表头设计好后，把各列中的水平号换算成各因素的具体水平就成实验方案。、列号实验号LBPH温度结果150%320 C2100%630 C3150%940 C450%930 C5100

4、%340 C6150%620 C750%640 C8100%920 C9150%330 C2、实验步骤全班分为两个大组， 每组独立完成一次实验，互为重复。按照1.4中的实验安排，进行九组实验，分别编号为Al、A、A3、A4、A、A6、A7、A8、A9；B、B2、B3、B4、B5、R、B7、Be、已；培养基的配制： 取土豆300g，切成尽量小的块，加入 1000ml水，加热煮沸30分钟；过滤，取滤液，定 容在1000ml;备用。 取100ml滤液，加蒸馏水稀释，定容至300ml，分装入三个250ml三角瓶中，分别编号为 Al、A2、A ； 取200ml滤液，加蒸馏水稀释，定容至300ml，分装入

5、三个250ml三角瓶中，分别编号为 A、A、A ； 直接量取3组100ml滤液，分装入三个 250ml三角瓶中，分别编号为 氏、As、A9； B组实验操作同A组；按照下表进行操作:编号AAA3AAAAAA试剂土豆浸汁100ml （具体操作见培养基的配制）蔗糖g/L102030102030102030PH369936693培养温度20 C30 C40 C30 C40 C20 C40 C20 C30 C结果四、结果与讨论将所测得得数据填入表 31中。按极差（R）分析法（方差法）进行数据分析: 计算各因素同一水平之和。如A因素各水平之和：A因素Ti =+；A因素T2 =+；A因素T3=+ 计算各因素同一水平得平均值。如：A因素Xi（+）/3 ； A因素X2（+）/3 ；A因素X3（+）/3 计算极差R,决定影响因素的主次顺序R = X max - Xmin因素的影响力顺序与极差大小顺序相同。假设：FA： 87； RB： 52； R c： 222； Rd： 30；则各因素的对枯草芽孢杆菌生长的影响力顺序为：CABD 筛选最优组合假设A因素中X max为X3 , B因素中X ma