血清酶测定标准化的实验研究

1、血清酶测定标准化的实验研究郭健 王清涛 童清 杨振华 血清酶测定是临床实验室中一项重要的常规工作，检测结果对疾病的诊断及治疗监测有着很大的参考价值。目前，用于血清酶定量测定的方法通货膨胀以测定酶的活性为主，即酶的催化反应速率。由于酶蛋白本身的生物特点及其对催化反应条件要求的特殊性，使不同实验室的测定结果间存在较大的差异，可比性远不如其他检测项目。为使血清酶定量（活性）测定的结果具有可比性，国际临床化学联合会（IFCC）等不同的专业学会先后提出了酶活性定量测定的推荐方法，在很大程度上改进了测定结果的一致性，使血清酶测定向标准化迈进了一大步。伴随基础研究的深入，人源酶制品特别是源于基因工程的酶制品

2、，其线性度和稳定性都有了很大提高，酶参考品（reference material）和酶校准品(calibrator)的大量成功制备为其在临床实验室中的应用奠定了基础。 本项研究拟通过酶校准品的应用，探讨血清酶活性测定时准确度的溯源性，比较不同实验室使用校准品前后测定结果间的离散程度，为进一步开展血清酶定量测定标准化工作提供实验数据。 1、酶标准品：液体型人源生物制品，3ml/瓶（日本旭化成株式会社）。 2、血清样品：混合人血清（HIV 抗体阴性），3个不同浓度，1ml/瓶（北京市临床检验中心提供）。3、参加单位：北京市各级医院检验科、门诊部化验室等150家实验室。 二、试验方法 1、校准前试验

3、：由组织单位向参加实验室发放酶标准品1支，血清样本3支，要求实验室现行操作规程要求进行定标（用K值计算时省略此步）和室内质控测定，分别测定3个水平面的血清样本，每个样本做双份测定，记录检验结果；再测定酶标准品，重复测定10次，记录检验结果。 2、校准后试验：以单点定标方式设定仪器校准参数，输入酶校准品的标示值，进行定标。分别测定3个水平的血清样本，每个样本做双份测定，记录检验结果。 3、结果统计：全部参加试验的单位在指定日期内完成试验并将试验结果寄到临床检验中心，由北京市临床检验中心进行统计计算。统计过程中一次性排除大于“ 2s”的数据。计算使用Microsoft Excel软件。 结果1、血

4、清酶测定结果的准确性：参加本次试验的全部实验室利用其实验室血清酶常规测定方法测定酶标准品，测定结果见表1，按所使用试剂进行分类的测定结果见表2，按使用仪器分类的测定结果见表3。注 :ALT: 丙氨酸氨基转移酶； AST ：天门冬氨酸氨基转移酶； ALP ：碱性磷酸酶； AMY ：淀粉酶； CK ：磷酸肌酸激酶； GGT ： r- 谷氨酰基转移酶； LD ：乳酸脱氢酶；偏倚 = （测定均值 - 标示值） / 标示值 X100%校准对血清酶测定结果的影响：参加试验的实验室在使用统一的校准品前后分别对 3 个临床样本进行测定，测定结果见表 4 至表 6 。 注：试剂分类 R1-R14 分别为： Ro

5、che 、 Beckman-Culter 、 Randox 、柏定、科华、东瓯、利得曼、长征、莱邦、中生、科龙、科美、天象人及其他厂家 表 3 不同仪器测定结果的准确性分析 注：仪器编码 A01A14 分别为： HITACHI 、 OLYMPUS 、 TECHNECON 、 BECKMAN CX 、 TBX-30 ，荷兰威图、 BT-2000/2045 、 CORNING 、 COBAS MIRA 、岛津、 SABA 18 、 ASCA 、澳斯龙 300 、 DIMENSION AR/RXL 、其他 表 4 水平 1 血清样本校准前后测定结果的比较 表 5 水平 2 血清样本校准前后测定结果的

6、比较 表 6 水平 3 血清样本校准前后测定结果的比较 讨论 1、血清酶测定是临床实验室中最为常见的检验项目 , 对诊断疾病的发生、发展有着重要的意义。参加本次试验的临床实验室分别属于不同等级的医院，用于进行测定的仪器、试剂、校准品源自国内外多个不同厂家。参加实验室分别以各自的分析系统测定酶标准品，其结果的总体均值与酶标准品标示值间的相对偏倚 6% 的项目有 ALT 、 AST 、 AMY 和 LD ，表明这 4 种检测项目具有向国际标准品较好的溯源性。而 ALP 、 GGT 、和 CK 的实验室检测结果均值与标准品标示值间的相对值偏倚在 10%-20% ，提示 3 种酶实验室测定结果的可溯源

7、性较差（图 1 ）。同时，有些血清酶测定结果存在较大的标准差（ s ），如 AMY （表 1 ），说明临床实验室检验结果间存在较大的准确性差异。 2、分别按仪器或试剂进行分类统计，以 ALT 和 CK 测定结果为例，偏倚比较见表 2 、 3 。说明试剂和仪器的不同对测定结果有较大的影响。按试剂分类时， ALT 和 CK 测定结果均值最大偏倚分别为 12.6% 和 24.9%. 按仪器分类时 ,ALT 和 CK 测定结果均值的最大偏倚分别为 21.4% 和 34.7%. 因此 , 仪器的校准对血清酶测定结果的准确性起着更为重要的作用 . 3、目前 , 大多数临床实验室在测定血清酶活性时不用校准品

8、 , 而是根据仪器系统特性 , 用给定的系数 (K 值 ) 计算酶活性 . 虽然 , 一些学术团体 ( 如国际临床化学联合会 ,IFCC) 也已推出了血清酶活性测定的推荐方法及试剂配方 , 但众多生产厂家生产的试剂间仍不可避免地存在着差别 ( 如底物浓度 , 缓冲液组成、 PH 及浓度，辅酶纯度及浓度 ) ，这些因素在不同程度上影响到用 K 值计算出的酶活性结果。本次试验结果表明，在应用校准品后，多数测定结果的变异系数（ CV% ）得到不同程度的改善， ALT 由 10%-44% 下降至 8%-42% ， LD 由 16%-39% 下降至 8%-11% （表 4-6 ）。因此，正确应用酶校准品