珠江口咸淡水蛭弧菌的生物学特性及其应用的初步研究

1、珠江口咸淡水蛭弧菌的生物学特性及其应用的初步研究英文题名 Biological Characteristics and Application of Bdellovibrio Sp. Isolated from Brackish Water of Pearl River 关键词 蛭弧菌; 致病菌; 裂解谱; 鼠伤寒沙门氏菌; 生物学特性; 裂解能力; 英文关键词 Bdellovibrio sp.; pathogen; lysis spectrum; Salmonella typhimurium; biological characteristic; lysis ability; 中文摘要 蛭弧

2、菌是一类专门以捕食细菌为生的寄生型细菌,广泛存在于淡水、污水、沉淀物、土壤和植物根际等环境,可穿入宿主细菌的细胞壁并在其内繁殖,最终造成宿主细菌裂解死亡。采用生物方法,利用蛭弧菌的寄生型特性和宿主范围广的特点,消除或者抑制致病菌,与容易引起很多副作用的抗生素相比,将蛭弧菌用于食品安全或防治水产养殖病害,是一个非常合适的选择。目前国内外从海水和淡水中分离出的蛭弧菌报道较多,而利用大肠杆菌DH5为宿主,从介于两者之间的咸淡水环境中分离出的蛭弧菌及其生物特性和应用研究未曾报道。本实验从咸淡水中分离纯化3株蛭弧菌,研究其生物学特性,为丰富蛭弧菌的菌种库和探寻其运用于食品安全或防治水产养殖病害的可行性打

3、下基础。 本实验采用DNB双层平板法以大肠杆菌DH5作为宿主菌从珠江入海口的海水中筛选得到3株可以裂解DH5的蛭弧菌,分别命名为DLR-LDLR-M和DLR-S。通过观测3株菌在DNB双层平板上形成的噬菌斑的形状,同时用透射电镜观察它们的形态,并对照伯杰氏细菌鉴定手册(第九版),可以鉴定这3株菌为蛭弧菌。 本研究结果表明,3株咸淡水蛭弧菌对44株致病或潜在致病菌的具有比较好的裂解能力,DL. 英文摘要 Bdellovibrio is an obiligate predator that replicates inside a wide range of bacterial prey. Bdel

4、lovibrios have been found in fresh water, sewage, sediment, soil and rhizosphere, they can penetrate into the cell wall of prey 摘要 6-7 ABSTRACT 7-8 第一章 绪论 12-31 1.1 蛭弧菌简介 12-23 1.1.1 蛭弧菌的分类地位 12 1.1.2 蛭弧菌的形态和结构 12-13 1.1.3 蛭弧菌的分布 13 1.1.4 蛭弧菌裂解宿主菌机理 13-17 1.1.5 蛭弧菌的基因组特征 17-19 1.1.6 蛭弧菌的潜在应用 19-23 1

5、.2 食源性疾病研究现状 23-24 1.2.1 食品安全与食源性疾病 23-24 1.3 鼠伤寒沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌病 24-26 1.3.1 鼠伤寒沙门氏菌概况 24-25 1.3.2 鼠伤寒沙门氏菌病 25-26 1.4 本实验的研究目的和意义 26-27 本章参考文献 27-31 第二章 蛭弧菌的分离纯化及鉴定 31-42 2.1 引言 31 2.2 材料与仪器 31-34 2.2.1 实验材料 31 2.2.2 试剂 31-32 2.2.3 培养基 32-33 2.2.4 溶液 33 2.2.5 仪器和设备 33-34 2.3 实验方法 34-36 2.3.1 蛭弧菌筛选 34-

6、35 2.3.2 蛭弧菌的分离纯化 35-36 2.3.3 蛭弧菌的电镜观察鉴定 36 2.4 结果与分析 36-40 2.4.1 蛭弧菌分离、纯化结果与分析 36-37 2.4.2 蛭弧菌鉴定结果与分析 37-39 2.4.3 讨论 39-40 2.5 本章小结 40 本章参考文献 40-42 第三章 蛭弧菌的裂解谱 42-56 3.1 引言 42-43 3.2 材料、试剂和设备 43-46 3.2.1 实验菌株 43-44 3.2.2 试剂 44-45 3.2.3 培养基 45 3.2.4 溶液 45 3.2.5 设备 45-46 3.3 实验方法 46-47 3.4 结果与讨论 47-5

7、4 3.4.1 结果 47-54 3.4.2 讨论 54 3.5 本章小结 54 本章参考文献 54-56 第四章 蛭弧菌消除罗非鱼鱼片表面鼠伤寒沙门氏菌的研究 56-72 4.1 引言 56 4.2 材料与设备 56-59 4.2.1 材料 56-57 4.2.2 试剂 57 4.2.3 培养基 57-58 4.2.4 溶液 58 4.2.5 仪器和设备 58-59 4.3 实验方法 59-61 4.3.1 鼠伤寒沙门氏菌的OD-菌数标准曲线测定的 59 4.3.2 蛭弧菌DLR-M的 OD-菌数标准曲线的测定 59-60 4.3.3 样品准备 60 4.3.4 消除试验具体步骤 60-61

8、 4.4 结果与讨论 61-71 4.4.1 鼠伤寒沙门氏菌的OD-菌数标准曲线 61-63 4.4.2 蛭弧菌DLR-M的 OD-菌数标准曲线 63-64 4.4.3 鱼品质的变化 64-65 4.4.4 pH值的变化 65-66 4.4.5 DLR-M的检测结果 66-67 4.4.6 总菌含量的检测结果 67-68 4.4.7 致病菌含量的检测结果 68-69 4.4.8 综合分析 69-71 4.5 本章小结 71 本章参考文献 71-72 结论与展望 72-74 结论 72-73 创新点 73 展望 73-74 2.4.1 蛭弧菌分离、纯化结果与分析 36-37 2.4.2 蛭弧菌鉴

9、定结果与分析 37-39 2.4.3 讨论 39-40 2.5 本章小结 40 本章参考文献 40-42 第三章 蛭弧菌的裂解谱 42-56 3.1 引言 42-43 3.2 材料、试剂和设备 43-46 3.2.1 实验菌株 43-44 3.2.2 试剂 44-45 3.2.3 培养基 45 3.2.4 溶液 45 3.2.5 设备 45-46 3.3 实验方法 46-47 3.4 结果与讨论 47-54 3.4.1 结果 47-54 3.4.2 讨论 54 3.5 本章小结 54 本章参考文献 54-56 第四章 蛭弧菌消除罗非鱼鱼片表面鼠伤寒沙门氏菌的研究 56-72 4.1 引言 56

10、 4.2 材料与设备 56-59 4.2.1 材料 56-57 4.2.2 试剂 57 4.2.3 培养基 57-58 4.2.4 溶液 58 4.2.5 仪器和设备 58-59 4.3 实验方法 59-61 4.3.1 鼠伤寒沙门氏菌的OD-菌数标准曲线测定的 59 4.3.2 蛭弧菌DLR-M的 OD-菌数标准曲线的测定 59-60 4.3.3 样品准备 60 4.3.4 消除试验具体步骤 60-61 4.4 结果与讨论 61-71 4.4.1 鼠伤寒沙门氏菌的OD-菌数标准曲线 61-63 4.4.2 蛭弧菌DLR-M的 OD-菌数标准曲线 63-64 4.4.3 鱼品质的变化 64-6

11、5 4.4.4 pH值的变化 65-66 4.4.5 DLR-M的检测结果 66-67 4.4.6 总菌含量的检测结果 67-68 4.4.7 致病菌含量的检测结果 68-69 4.4.8 综合分析 69-71 4.5 本章小结 71 本章参考文献 71-72 结论与展望 72-74 结论 72-73 创新点 73 展望 73-74 2.4.1 蛭弧菌分离、纯化结果与分析 36-37 2.4.2 蛭弧菌鉴定结果与分析 37-39 2.4.3 讨论 39-40 2.5 本章小结 40 本章参考文献 40-42 第三章 蛭弧菌的裂解谱 42-56 3.1 引言 42-43 3.2 材料、试剂和设备

12、 43-46 3.2.1 实验菌株 43-44 3.2.2 试剂 44-45 3.2.3 培养基 45 3.2.4 溶液 45 3.2.5 设备 45-46 3.3 实验方法 46-47 3.4 结果与讨论 47-54 3.4.1 结果 47-54 3.4.2 讨论 54 3.5 本章小结 54 本章参考文献 54-56 第四章 蛭弧菌消除罗非鱼鱼片表面鼠伤寒沙门氏菌的研究 56-72 4.1 引言 56 4.2 材料与设备 56-59 4.2.1 材料 56-57 4.2.2 试剂 57 4.2.3 培养基 57-58 4.2.4 溶液 58 4.2.5 仪器和设备 58-59 4.3 实验方法 59-61 4.3.1 鼠伤寒沙门氏菌的OD-菌数标准曲线测定的 59 4.3.2 蛭弧菌DLR-M的 OD-菌数标准曲线的测定 59-60 4.3.3 样品准备 60 4.3.4 消除试验具体步骤 60-61 4.4 结果与讨论 61-71 4.4.1 鼠伤寒沙门氏菌的OD-菌数标准曲线 61-63 4.4.2 蛭弧菌DLR-M的 OD