课题1DNA的粗提取与鉴定2PPT学习教案

1、会计学1 课题课题1DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定2 第1页/共18页 学生活动学生活动1: 一、基础知识 第2页/共18页 DNA在 在在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L 时，时，DNADNA的溶解度随的溶解度随NaClNaCl溶液浓溶液浓 度的增加而逐渐降低；在度的增加而逐渐降低；在0.14 0.14 mol/Lmol/L时，时，DNADNA溶解度最小；当溶解度最小；当 NaClNaCl溶液浓度继续增加时，溶液浓度继续增加时，DNADNA 的溶解度又逐渐增大。的溶解度又逐渐增大。 当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最

2、大 ，浓度为 014 molL时， DNA的溶解度最低。利用这一 原理，可以使DNA在盐溶液中 溶解或析出。 第3页/共18页 学生活动学生活动2: 第4页/共18页 二、实验方法及注意事项 第5页/共18页 学生活动学生活动3: 4、提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的 搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。如果 研磨不充分，会对实验结果产生怎样的 影响？ 第6页/共18页 探究活动探究活动4: 此步骤获得的滤液中可能含有哪些 细胞成分？ 为了纯化提取的DNA需要将滤液作怎 样的进一步处理？ 为什么反复地溶解与析出DNA，能够 去除杂质？ 方案二和方案三的原理有什么不

3、同 ？ 第7页/共18页 学生活动学生活动4: 第8页/共18页 1.1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得） 0.1g/mL柠檬酸钠柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒烧杯中，玻棒搅拌搅拌， 离心、分离或静置沉淀。离心、分离或静置沉淀。 2.2.提取提取DNA。 取血细胞取血细胞5-10mL20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向蒸馏水，用玻棒沿一个方向 快速搅拌快速搅拌。 纱布纱布过滤过滤：滤液中含：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。和其他核物质，如蛋白质。 .提取提取血血细胞核物质：细胞核物质： .溶解核内的溶解核

4、内的DNA： 滤液滤液2mol/L的的NaCl溶液溶液40mL，玻棒沿一个方向，玻棒沿一个方向轻缓轻缓 搅拌搅拌。 三、实验步骤 第9页/共18页 .析出析出含含DNA的粘稠物：的粘稠物： .滤取含滤取含DNA的粘稠物：的粘稠物： . DNA粘稠物的再溶解：粘稠物的再溶解： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅轻轻搅 拌拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（ 此时此时NaCl溶液的浓度相当于溶液的浓度相当于0.14mol/L）。）。 用多层纱布用多层纱布过滤过滤，含，含DNA的粘稠物留在纱布上

5、的粘稠物留在纱布上 。 20mL2mol/L的的NaCl溶液溶液 步骤含步骤含DNA的粘稠物的粘稠物 在20mL烧杯中烧杯中轻缓搅轻缓搅 拌拌3min，使尽可能多的，使尽可能多的 DNA溶解在溶解在NaCl溶液。溶液。 .过滤含有过滤含有DNA的的NaCl溶液：溶液： 用放有两层纱布的漏斗用放有两层纱布的漏斗过滤过滤步骤所得的溶液，滤液步骤所得的溶液，滤液 中含有中含有DNA。 第10页/共18页 .提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的DNA： 步骤所得的滤液体积分数为步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精的冷却酒精50mL ，用玻棒沿一个方向，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌轻缓搅拌，溶液中（，溶

6、液中（析出析出）出现）出现 乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取 上面的水分。上面的水分。 3.DNA的鉴定：的鉴定： 加入二苯胺试剂加入二苯胺试剂4mL，用玻棒，用玻棒搅拌搅拌使使DNA溶解，沸水溶解，沸水 浴浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。，观察溶液是否出现浅蓝色。 1.共有共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入加入“两次蒸馏水，两次蒸馏水，三次三次NaCl溶液，一次酒精，一次酒精 ” 三、实验小结三、实验小结 第11页/共18页 四、实验原理拓展介绍。四、实验原理拓展介绍。 1.DNA的释放。

7、的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释 放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以 大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌 的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释释 放出来的大量放出来的大量DNA与与RNA、蛋白质结合在一起，即释、蛋白质结合在一起，即释 放的不是纯净的放的不是纯净的DNA，常称为，常称为DNA核蛋白核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。与蛋白质分离。 在

8、高浓度（在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解 ，析出，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。的析出与获取。 因为因为DNA在低浓度（在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解）的氯化钠溶液中溶解 度小，而蛋白质的在其中的溶解度大度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含。所以在向含DNA 的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶 液，从而使液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。溶解度下降，蛋白质溶解度增高。 第12页/共

9、18页 4.DNA的再溶解。的再溶解。 用高浓度（用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物粘稠物 。 5.DNA的沉淀和浓缩。的沉淀和浓缩。 对于除去了蛋白质的对于除去了蛋白质的DNADNA的氯化钠溶液，必须再进的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法酒精沉淀法。即往。即往含有含有NaNa 的 的 DNADNA溶液，加入体积分数为溶液，加入体积分数为95%95%的冷却酒精，混匀后可的冷却酒精，混匀后可 以使以使DNADNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNADNA丝状物丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物

10、较少，可将混合液再放入冰悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNADNA丝状物可以用玻棒丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附（玻棒有吸附DNADNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。的作用）缓缓旋转的方法卷起。 6.DNA的鉴定。的鉴定。 100 DNA二苯胺二苯胺 蓝色物蓝色物 鉴定时蓝色的深浅与溶液中鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。的含量多少有关。 第13页/共18页 方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 3.溶解细胞核内的DNA 2

11、 m1L的NaCI溶液40mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl溶液 8.提取含有杂质较少的DNA 冷却的95的酒精50 mL A:(1)向试管中加入0.015 molL的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺试剂 第14页/共18页 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA

12、使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA 最大限度地释出最大限度地释出 使含使含DNA的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上 使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质 提取提取DNA A出现蓝色出现蓝色 B无变化无变化 第15页/共18页 2.实验中实验中NaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2 molL和和 0.14 molL对对DNA有何影响有何影响? 1.在在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯的粗提取实验过程中，两次向烧杯 中加入蒸馏水的作用是中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析析 出出 C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 答：答：B 答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出 第16页/共18页 3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )会染成会染成( ) ( ) A. A.砖红色砖红色