醋酸菌菌种分离筛选方法_第1页
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文档简介

1、醋酸菌菌种分离筛选方法醋酸菌的细胞为椭圆至杆状， 单个 成双或成链， 鞭毛周生或端生， 运动或不运动， 革兰氏阴性菌， 好氧菌， 一般在乙醇或其他可氧化物 的酵母煮液或酵母消化液培养基生长旺盛。 醋酸的钠盐和钙盐与三氯化铁共热， 生成红褐色沉淀，原液变成无色。 可进行分离菌鉴别。1. 培养基：1.1米曲汁乙醇碳酸钙培养基：米曲汁（10-12BX） 1000ml CaCO10-15g95%乙醇30-40ml （灭菌后加入）PH自然1.2 葡萄糖碳酸钙培养基：葡萄糖 15g/L 酵母膏 10g/L CaCO3 15g/LPH 6.81.3 乙醇 30mL/L 酵母膏 10g/L 葡萄糖 10g/L

2、 CaCO3 10-15g/L（常规筛选培养基） PH 6.8-7.0注：常规培养基中的碳酸钙易沉淀，平板不易观察到透明圈，选择米 曲汁乙醇碳酸钙培养基为好。1.4 醋酸菌保存培养基：酵母膏 15g/L 葡萄糖 10g/L CaCO3 15-20g/L 琼脂 15-20 g/L 3-4 滴乙醇/ 试管。1.5液体种子和发酵培养基：乙醇30-35mL/L膏酵母10g/葡萄糖10g/L KH2PO40.5g/L MgSO40.5g/LPH 6.5-6.82. 菌种筛选：2.1集菌：1-2g（5ml）样品，在无菌下加入 30-50ml/250ml米曲汁乙醇液体培养基（ 0.5ml 0.02 %结晶紫

3、醋酸溶液 /100ml 培养液）中， 30-33 C震荡培养24-48h，集菌液PH明显下降，有醋味，镜检细胞 革兰氏染色阴性。形态与醋酸菌相符即可分离。2.2 混菌法分离：（分离及初筛）适度稀释 10 、 10 、10 取 1.0ml 菌液置于无菌平板或涂布中，每 个梯度平行两次，米曲汁乙醇碳酸钙培养基倒平板，30C 24-48h ,观察有小菌落出现，菌落周围形成透明圈，圈的大小因菌而异。挑透 明圈出现早且菌落丰厚， 边缘整齐， 生长旺盛不同的菌落转接于曲汁 乙醇碳酸钙斜面，30-33 C 24-48h。根据菌落周围溶解透明圈大小初 步筛选出产酸高的菌种。2.3 性能测定：（复筛）不同菌落接

4、种于液体曲汁乙醇培养基（30-50ml/250ml）中，30 C震 荡培养 24-48h。 2.3.1 镜检：染色镜检细胞整齐，椭圆或短杆状， 革 兰氏阴性菌。2.3.2 性能测定：醋酸定性分析：取发酵液（离心去菌体） 5.0ml 于洁净试管中，用 10 %氢氧化钠中和PH至7.0 ,加入1 %三氯化铁溶液2-3滴，摇匀，观 察溶液是否变黄褐色， 加热共沸， 形成红褐色沉淀， 原液变无色者为 产醋酸细菌。生酸量测定：1.0ml发酵液于150ml三角瓶中，加中性蒸馏水10-20ml, 酚酞指示剂 2 滴，用 0.1mol/l 氢氧化钠滴定至微红色。醋酸量（ g/100mL） = 氢氧化钠摩尔浓度 .Vx60.06x10

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