第四组氢化可的松、黄体酮、雌二醇的鉴别和区分

1、 O HO OH OCH2OH H HH C O HH H CH3 O OH HO 17 18 基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲 C20 C21 AB CD 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 三种药物同属于甾体激素类药物三种药物同属于甾体激素类药物 l环上双键的表示方法：环上双键的表示方法： l 用用“ ”表示表示 ,双键的位置写在双键的位置写在 的右的右 上角。上角。 双键位置 双键位置 4 5 4 1 4 2 5 1,4 5 6 5 10 5 5(10) 知识点回顾知识点回顾 l环上取代基构型表示方法：环上取代基

2、构型表示方法： 构型：构型： l与母核连接的取代基与母核连接的取代基, ,指向环平面的前指向环平面的前 面时面时, ,为为 构型构型. .用实线表示用实线表示“” 构型：构型： l与母核连接的取代基与母核连接的取代基, ,指向环平面的背指向环平面的背 面时面时, ,为为 构型构型. .用虚线表示用虚线表示“” 按药理作用分类：按药理作用分类： 甾体激素甾体激素 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素- 氢化可的松氢化可的松 性激素性激素 雄性激素及蛋雄性激素及蛋 白同化激素白同化激素 孕激素孕激素黄体酮黄体酮 雌激素雌激素-雌二醇雌二醇 O HO OH OCH2OH H HH 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激

3、素 氢化可的松氢化可的松 1.有有21个碳原子个碳原子 2. A环环4-3-酮基酮基, UV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应 3.C17位上有位上有a-醇酮基醇酮基,具还原性具还原性 一、结构与性质一、结构与性质 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 4 3 酮酮 UV、与羰基、与羰基 试剂反应试剂反应 C17 羟基羟基可成酯可成酯 官能团的反应官能团的反应 1 C17 醇酮基醇酮基还原性还原性 A. 呈色反应呈色反应 肾上腺皮质肾上腺皮质 激素药物激素药物 呈色呈色 四氮唑盐四氮唑盐 OHOH 肾上肾上 腺皮腺皮 质激质激 素药素药 物物 Cu2O

4、橙红色 橙红色 碱性碱性 酒石酸铜酒石酸铜 B. B. 沉淀反应沉淀反应 Ag黑色 黑色 氨制硝酸银氨制硝酸银 多伦试剂多伦试剂 斐林试剂斐林试剂 甾酮类激甾酮类激 素药物素药物 呈色呈色 羰基试剂羰基试剂 2. C3酮基和酮基和C20酮基酮基 常用的羰基试剂：常用的羰基试剂： 2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼 C O HH H CH3 O 孕激素孕激素 黄体酮黄体酮 1.母核有母核有21个碳原子个碳原子 2. A环环4-3-酮基酮基 3.C17位上有甲酮基位上有甲酮基 孕激素孕激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 4 3 酮酮 UV、与羰基试、与羰

5、基试 剂反应剂反应 C17 甲酮基甲酮基 与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰 化钠反应化钠反应 O C CH3 O 2 N CONHNH2 HCl 黄体酮黄体酮 CONHN C CH3 NHNOC N N 异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色） 具有甲酮基具有甲酮基 或活泼亚甲或活泼亚甲 基的甾体激基的甾体激 素类药物素类药物 呈色呈色 亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳 间二硝基酚间二硝基酚 芳香醛芳香醛 含有含有 甲酮基甲酮基 黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色 亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳 其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色 不显色不显色 亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳 亚硝基铁氰化钠是亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应黄

6、体酮专属而灵敏的反应 C O CH3 O 黄体酮黄体酮 NOCNFe OH H2O2+ -4 Fe 5 CNNOCH C O O 雌性激素雌性激素 1.母核有母核有18个碳原子个碳原子,C10无角甲基无角甲基 2. A环为苯环环为苯环, C3位上有酚羟基位上有酚羟基 3.C17位上有位上有-羟基羟基 O H HO 17 18 雌二醇雌二醇 雌激素雌激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 A环为环为3OH 苯环苯环 UV、与重氮苯、与重氮苯 磺酸盐反应磺酸盐反应 C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3反应反应 C17 羟基羟基可成酯可成酯 雌激素雌激素 类药物类药物 红色偶红色偶 氮染料氮染料 重

7、氮苯磺酸重氮苯磺酸 酚羟基酚羟基 l小结小结 甾体激素甾体激素碳原子碳原子 数数 A环环17位取代基位取代基 肾上腺皮质肾上腺皮质 激素激素 21 4-3-酮酮 -醇酮基醇酮基 雄性激素雄性激素19 4-3-酮酮 -OH -CH3 孕激素孕激素21 4-3-酮酮甲酮基甲酮基 雌激素雌激素18苯环C 3 -酚 OH -OH -CCH 共同点共同点 与强酸的呈色反应与强酸的呈色反应 甾体激素甾体激素 类药物类药物 呈色呈色 H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl 与硫酸呈色操作简便，依与硫酸呈色操作简便，依 颜色与荧光可区别，反应灵敏，颜色与荧光可区别，反应灵敏， 为各国药典所用。为各国药典所

8、用。 如中国药典：氢化可的松，如中国药典：氢化可的松， 取本品取本品2 mg2 mg，加硫酸，加硫酸2 ml2 ml溶解，溶解， 放置放置5 5分钟，显棕黄至红，并显分钟，显棕黄至红，并显 绿色荧光，将此溶液倾入绿色荧光，将此溶液倾入10ml10ml 水中，即变黄色至红色，同时水中，即变黄色至红色，同时 有少量絮状沉淀生成。有少量絮状沉淀生成。 与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀释加水稀释 醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 无无 褪色并澄褪色并澄 带橙色带橙色 清清 -3-酮 酮 约约240nm 苯环苯环 约约280nm OCCC CCCCCC 鉴别方法鉴别方法 1、

9、用用UV法区分雌二醇和氢化可的松、法区分雌二醇和氢化可的松、 黄体酮黄体酮 规定最大吸收波长规定最大吸收波长 最大吸收波长处的吸收度最大吸收波长处的吸收度 某两个吸收波长处吸收度的比值某两个吸收波长处吸收度的比值 2 2、用异烟肼比色法区分雌二醇和氢用异烟肼比色法区分雌二醇和氢 化可的松、黄体酮化可的松、黄体酮 原理原理 ：C C3 3酮基及某些其他位置上酮基及某些其他位置上 的酮基能在酸性条件下与羰基试剂的酮基能在酸性条件下与羰基试剂 异烟肼缩合，形成黄色的异烟棕，异烟肼缩合，形成黄色的异烟棕， 在一定波长处具有最大吸收在一定波长处具有最大吸收 HClHCl （缩合）（缩合） C3酮基酮基

10、异烟肼异烟肼 异烟棕（黄色）异烟棕（黄色） CONHN OH N 异烟腙（黄色）异烟腙（黄色） 黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色 亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳 其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色 不显色不显色 亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳 3 3、区分氢化可的松和黄体酮区分氢化可的松和黄体酮 亚硝基铁氰化钠是亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应黄体酮专属而灵敏的反应 max=465 max=515 1. 1. 原理原理 雌激素（如雌二醇）与硫酸雌激素（如雌二醇）与硫酸 乙醇反应呈色乙醇反应呈色 KoberKober反应比色法反应比色法 桃桃红红黄黄色色雌雌激激素素 乙乙醇醇 OHSOH l双变色，测定结果

11、重现性不好双变色，测定结果重现性不好 l杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰）杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰） lA A环是芳环，在环是芳环，在C C2 2或或C C3 3有含氧取代有含氧取代 lD D环的环的C C17 17有含氧取代（ 有含氧取代（OH,-C=OOH,-C=O） lC C13 13必须有角甲基 必须有角甲基 l用该法测定雌激素类药物制剂的用该法测定雌激素类药物制剂的 含量时比色测定前采用分离提取含量时比色测定前采用分离提取 l严格控制反应条件严格控制反应条件 l消除背景干扰消除背景干扰 l铁酚试剂替代硫酸乙醇铁酚试剂替代硫酸乙醇 lFe Fe 3+ 3+的作用： 的作用： l促进

12、黄色的呈色速度和强度促进黄色的呈色速度和强度 l促进黄色变成红色促进黄色变成红色 l加强红色的稳定性加强红色的稳定性 l苯酚的作用：苯酚的作用： l消除反应过程中产生的荧光消除反应过程中产生的荧光 l加速红色的生成加速红色的生成 4、TLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的要求供试品溶液所显主斑点的颜颜 色和位置色和位置与对照品溶液的主斑点相同。与对照品溶液的主斑点相同。 用异烟肼比色法测定甾体激素药用异烟肼比色法测定甾体激素药 物含量时，其溶液的环境是物含量时，其溶液的环境是 A A强酸性强酸性 B

13、 B中性中性 C C强碱性强碱性 D D弱碱性弱碱性 E E以上都不对以上都不对 可用于氢化可的松鉴别的试剂有可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A A氨制硝酸银氨制硝酸银 B B异烟肼异烟肼 C C红四氮唑红四氮唑 D D硫酸硫酸 E E重氮苯磺酸重氮苯磺酸 可用于甾体激体类药物的测定方法有可用于甾体激体类药物的测定方法有 A A高效液相色谱法高效液相色谱法 B B四氮唑盐法四氮唑盐法 C C紫外分光光度法紫外分光光度法 D D异烟肼比色法异烟肼比色法 E EKoberKober反应比色法反应比色法 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰 紫色的药物是紫色的药物是 A雌二醇雌二醇

14、 B黄体酮黄体酮 C醋酸可的松醋酸可的松 D苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙 E以上都不对以上都不对 各国药典对甾体激素类药物常用各国药典对甾体激素类药物常用HPLCHPLC或或GCGC法法 测定其含量，主要原因是测定其含量，主要原因是 A. A. 它们没有特征紫外吸收，不能用它们没有特征紫外吸收，不能用 紫外分光光度法紫外分光光度法 B. B. 不能用滴定分析法进行测定不能用滴定分析法进行测定 C. C. 由于由于“其它甾体其它甾体”的存在，色谱法的存在，色谱法 可消除它们的干扰可消除它们的干扰 D. D. 色谱法比较简单，精密度好色谱法比较简单，精密度好 E. E. 色谱法准确度优于滴定分析法色谱法准

15、确度优于滴定分析法 异烟肼比色法测定甾体激素类药物时， 药物的呈色基团是 A. 酮基 B. 酚羟基 C. 活泼次甲基 D. 炔基 E. 甾体母核 可适用的药物：可适用的药物： A. 可的松可的松 B. 雌二醇雌二醇 C. 两者均可两者均可 D. 两者均不可两者均不可 亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法 高效液相色谱法高效液相色谱法 能与羰基试剂缩合能与羰基试剂缩合 可用铁酚试剂比色法测定可用铁酚试剂比色法测定 可用四氮唑比色法测定可用四氮唑比色法测定 D C A B A Kober反应是 A. 雌性激素与硫酸乙醇共热呈色 B. 皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色 C. 雌性激素与硫酸乙醇共热呈色， 用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变 D. 维生素A与无水三氯化锑的无醇氯 仿溶液呈色 E. 异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色 黄体酮在酸性溶液中可与下