紫花地丁多糖提取完整版

1、 背景及意义 紫花地丁性寒，味微苦，有清热解毒，凉血消肿 的功效。主治用于痈肿疔疮、乳痈肠痈、丹毒肿痛、 毒蛇咬伤等症。现代药理学发现其具有抑菌、调节免 疫的作用。近年来的研究还表明，紫花地丁所含的磺 化聚糖能抑制艾滋病活性，在低于毒性剂量的浓度下， 可完全抑制艾滋病毒（HIV）的生长，紫花地丁的二 甲亚砜提取物具有很强的体外抑制HIV的活性，在防 治艾滋病方面有较好的前景。 背景及意义 多糖广泛分布于动物、植物和微生物中，是一类 结构复杂的天然高分子化合物，对动植物的生命至关 重要。大量的药理和临床研究表明，多糖具有广泛的 药理及生物活性，如免疫促进、抗肿瘤、抗病毒、降 血糖、降血脂、抗衰老

2、等，在保肝、保护神经元等方 面也具有一定的作用。 背景及意义 紫花地丁的取材方便，且其发展前景可观。但鲜 有其多糖提取工艺的有关文献，现做最优工艺筛选 （超声、微波、水提）实验，以求得到最佳提取工艺， 以便后续研究。 研究目标 本实验通过对三种紫花地丁多糖提取工艺（超 声、微波、水提）的筛选，来选出最优的多糖提取工 艺方法，以便后续对紫花地丁的药理、化学性质和药 用价值的后续研究，充分发挥其临床作用，开发新的 药理活性。 研究内容 通过平行试验，进行紫花地丁多糖提取的最佳工 艺筛选，观察三种工艺（超声、微波、水提）的提取 效果，并测所提的多糖含量，采用硫酸-苯酚法对提 取后样品的含糖量进行初步

3、比较，得出最佳的提取方 法。 研究方法 进行三种提取工艺（超声、微波、水提）筛选； 硫酸-苯酚法测定多糖含量 具体措施 1.原料预处理： 挑选新鲜的紫花地丁，用真空冷冻干燥制成风干 样品，经粉碎，过筛备用。 2.多糖测定方法： 测定方法采用苯酚-硫酸法。 紫花地丁多糖测定标准曲线绘制：精密称取干燥至恒重的 分析纯葡萄糖0.0020g于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸 取0.00、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60ml，各以 水补至2.0ml，然后加入6苯酚2.0ml及浓硫酸7.0ml，混匀， 置沸水浴中15min，取出，放入冷水中冷却至室温，于490nm

4、 测定吸光度A值。 计算：多糖含量=（C*V）/M*100 式中：C为提取离心后溶液中多糖的浓度，（g/ml）；V为溶液 体积，ml；M为提取所用紫花地丁质量，g。 具体措施 3.超声波法提取紫花地丁多糖正交试验设计： 通过单因素试验确定出以：超声功率、超声波作 用时间、液料比、温度为正交试验的四因素，分别取 3个水平，做L9（34）正交试验的4因素。取干燥样 品50g若干份，加入一定量的蒸馏水，利用超声波进 行处理，以多糖含量为指标，用苯酚-硫酸法测定多 糖含量，确定最佳的超声波法提取工艺条件。 具体措施 4.微波法提取紫花地丁多糖正交试验设计： 通过单因素试验确定出以：微波功率、微波时间、

5、 液料比、温度为正交试验的四因素，分别取3个水平， 做L9（34）正交试验的4因素。取干燥样品50g若干 份，加入一定量的蒸馏水，利用微波进行处理，以多 糖含量为指标，用苯酚-硫酸法测定多糖含量，确定 最佳的微波波法提取工艺条件。 具体措施 5.水提法提取紫花地丁多糖正交试验设计： 通过单因素试验确定出以：提取时间、液料比、 温度为正交试验的三因素，分别取3个水平，做L9 （33）正交试验的3因素。取干燥样品50g若干份， 加入一定量的蒸馏水，利用热水浸煮进行处理，以多 糖含量为指标，用苯酚-硫酸法测定多糖含量，确定 最佳的水提法提取工艺条件。 具体措施 6.结果分析： 通过对三种方法到底结果

6、进行分析，对三种提取 方法进行比较，得出最佳提取工艺。 可行性、创新点 可行性 实验材料易得， 方法简便可行，根 据现有实验室设施 可以进行。 创新点 首次对多种多糖 提取工艺进行筛选 比较。 文献 1.刘湘新，刘进辉，刘自逵，等.紫花地丁的有效成分分析及抗 菌作用研究J.中兽医医药杂志，2004，（3）：16-18. 2.李定刚，张武刚，宋毓民，等.紫花地丁抗菌活性成分研究J. 西北农林科技大学学报（自然科学版），2006,34（4）：87- 90. 3.Ngan Fung,Chang RS,Tabba HD,et al.Isolation,purification and partial

7、characterization of an active anti-HIVcompound from the Chinese medicinal herb viola yedoensisJ.Antiviral Res,1988,10(1-3):107-116. 4.庞春红.多糖药理作用研究进展J.浙江中医药大学学报， 2011,35（4）:639-640. 5.谷绒.超声波和微波法对木耳多糖提取量的比较J.食品研究 与开发，2010，（3）. 进度安排 2012年5月：整理文献资料，确定实验操作具体过程； 2012年8月2012年12月：三种提取工艺的实施和多 糖含量测定； 2013年1月：对效果