BKV病毒的检测-2017

1、 1971年，在肾移植接受者的尿液样本中首次发现； 多瘤科病毒，BKV、JCV 及 SV40是目前所知的多瘤病毒家族所有成员； 人体的肾、肺、眼、肝、脑等器官都可作为BK病毒的生长部位，并引起相关 的疾病； 无包膜，含有二十面体、直径45nm的衣壳，病毒基因组为5300bp的环形双 链DNA。其基因组可分为调控基因、早期基因、晚期基因三部分； 许多证据表明，BK病毒与出血性膀胱炎、肾炎相关，BK病毒容易侵犯免疫缺 陷患者，特别是实体器官移植和骨髓移植的接收者。 在儿童早期病毒血清阳性率60100。原发性 BKV感染常发生于45岁时，成年人抗体阳性率为 46%94% ； 儿童感染一般无症状，典型

2、症状是发烧和非特异性 上呼吸道感染； 初次感染后，此病毒在正常人体内呈潜伏状态，在 器官移植病人中，BKV病毒经常激活导致疾病； 传播途径：暴露的体液，例如唾液，或是通过胎盘 传播。 感染肾：表现为出血性膀胱炎（出血性 膀胱炎则增加住院时间和病人死亡率）、 非出血性膀胱炎、输尿管狭窄和肾炎； 感染肺：肺炎和急性非特异性上呼吸道 感染； 在各种肿瘤样本中检测到BKV病毒，主 要是神经胶质和神经元脑瘤； 中枢神经系统疾病； 到目前为止，关于眼部感染仅有的报告 为双侧非典型视网膜炎。 免疫抑制状态下，潜伏在体内的BKV可再次激活； 肾移植术后BKV再次激活发生率高：10%68%，BKV相关肾病患病率

3、：17%； 移植肾丧失功能几率高：50% 的BKVN会导致移植肾失功； BKV和JCV具有75% 的同源性，区分BKV和JCV还是非常重要的，因为JCV很少 引起多瘤病毒相关肾病，与肾脏损伤不相关。 BKV感染在临床上经常被误诊为急性排斥或是药物毒性。 Deepali Kumar , Atul Humar ,et.al. The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition. 2011,51-54. 尿液 BKV-DNA 荧光定量pcr法 VS 尿液 Decoy细胞 l人员要求不高，易于培训 l灵敏度高、特异性强 l可实现自动化，客观性强

4、l重复性好 l需要有经验的病理学专家，主观性较强 l依据形态不能区分BK病毒和其他病毒 感染，例如：JCV l灵敏度低特异性差 美国器官移植手册建议：肾移植后，成人两年内至少每3个月检测一次； 儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次； BKV-DNA浓度107 copies/mL ，建议三个月内复查。 BKV-DNA浓度107 copies/mL，建议检测BKV病毒血症。 BK病毒尿是病毒开始活动复制的第一标志。 早期检测对控制BK病毒的复制，早期干预具有重大意义。 研究发现，尿BKV阳性出现在血BKV阳性之前，约有33的肾移植受者 中会发现有BK病毒尿症。 注：拷贝数阈值可以根据所

5、使用的测定法而变化 Deepali Kumar , Atul Humar ,et.al. The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition. 2011,51-54. 所谓 decoy 细胞指脱落尿中的含有病毒包涵体的移行细胞。在沉渣尿涂 片巴氏染色下, decoy细胞很容易辩认。 含病毒包涵体的细胞核有三种表现:典型最多见为不透明的毛玻璃(或冻胶) 样改变,或颗粒状嗜硷性包涵体占据整个细胞核,周围无明显的晕圈;或仅 核周围存在高密度的染色质;少见可出现鹰眼样改变即核中央出现着色过 深的包涵体。 尿细胞学检测与尿液BKV-DNA 荧光定量

6、PCR对BKVN的筛选一样具有重 要临床意义，但是灵敏度和特异性较低。 在组织学检查阴性而PCR阳性的病人最终约有半数以上病人发展为BKVAN , 一般认为从血PCR阳性到组织学证实BKVN有一个数周至数月的窗口期。 方法PCR法血浆BKV-DNA组织学活检 优点 l能够实时反映病毒感染的状 态，无窗口期 l抽取病人外周血即可，无需 肾穿刺 BKVN确诊金标准 可鉴别排斥反应 缺点无法确诊 l有一个数周数月的 窗口期 l需要取肾穿刺标本， 具有创伤性 美国器官移植手册建议：肾移植后，成人前3个月至少每月检测一次，之后 两年内每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测 一次；

7、 浓度104 copies/mL,一个月之内重复检测；推荐减少免疫抑制剂用量，建 议进行活检。 浓度104 copies/mL，推荐减少免疫抑制剂用量。至少每两周检测一次血 浆BKV-DNA，建议进行移植物活检。 监测血浆中BKV病毒的负荷量可作为调查免疫抑制剂用量、维持治疗时间的 一项临床指标。 Deepali Kumar , Atul Humar ,et.al. The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition. 2011,51-54. 注：拷贝数阈值可以根据所使用的测定法而变化 临床上,确诊BKVN必须通过肾穿刺标本的组织学检查。 光镜下表现为由浸润的单核淋巴细胞、小管炎和核内包涵体组成 的间质性肾炎。 免疫组化可用于检测石蜡包埋、冰冻组织或细胞学标本中的BKV