丙泊酚联合乌司他丁抑制人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭.doc

1、丙泊酚联合乌司他丁抑制人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭目的肿瘤的迁移与侵袭是肿瘤转移中最关键的步骤，丙泊酚和乌司他丁均有 抑制肿瘤迁移和侵袭的作用。本实验通过观察临床浓度的丙泊酚和乌司他丁联合 使用或不同给药顺序对人肺腺癌A549细胞迁移和侵袭的影响，探究在临床浓度 下，丙泊酚与乌司他丁的最佳给药顺序。同时通过检测临床浓度的丙泊酚和乌司他丁联合使用或不同给药顺序对人 肺腺癌A549细胞E-cadherin蛋白表达的影响,初步探究其影响人肺腺癌A549 细胞迁移和侵袭能力的机制，为丙泊酚和乌司他丁在肺癌手术中的合理应用提供 理论基础。方法1.实验分组取对数生长期的人肺腺癌A549细胞，分为7组：

2、(1) 空白对照组:基础培养基培养48小时(Control) ; (2)DMS0组:0. 1%DMSO培养48 小时(DMS0); (3)乌司他丁组:200U/mL乌司他丁溶液培养48小时(UTI); (4)丙泊 酚组:先用基础培养基培养42小时，再用30 uM丙泊酚溶液培养6小时(PPF): (5) 丙泊酚联合乌司他丁组:先用200 U/mL乌司他丁溶液培养42小时，再用200 U/mL 乌司他丁溶液+30 uM丙泊酚溶液培养6小时(UTI+ PPF); (6)先丙泊酚后乌司他 丁组(丙泊酚一乌司他丁组)：先用30 UM丙泊酚溶液培养6小时，再用200U/mL 乌司他丁溶液培养42小时(PP

3、FCTI); (7)先乌司他丁后丙泊酚组(乌司他丁一 丙泊酚组)：先用200 U/mL乌司他丁溶液培养42小时，再用30 M M丙泊酚溶液培 养 6 小时(UTI-*PPF) o2. Transwell迁移实验待7组细胞均生长融合至80%-90%,基础培养基饥饿处 理细胞12h,后分组给予刺激，消化离心后，加入基础培养基重悬至106个/ml,每 个Trans we 11上室加入100 P L细胞悬液，下室加入600 P L完全培养基，培养24 小时后取出上室，棉球擦去上室上层未迁移细胞,无水甲醇固定20分钟,0. 1%结 晶紫染色10分钟，后选9个固定视野于200倍显微镜下拍照,计细胞数并取平

4、均 值。细胞迁移抑制率/%=(1-实验组迁移细胞数/对照组迁移细胞数)X 100%o3. Transwell侵袭实验于细胞分组刺激同时，在每个Transwell上室PET膜 上铺Matrigel胶备用。余操作同Transwell迁移实验。细胞侵袭抑制率/%=(1-实验组侵袭细胞数/对照组侵袭细胞数)X 100%。4. Western blot检测E-cadherin蛋白的表达将A549细胞分组处理后，用蛋白 质免疫印迹法(Western blot)检测A549细胞中E-cadherin蛋白的表达。5. 统计学处理用SPSS 20. 0统计分析软件进行实验数据分析，以均数土标准 差&土 s)表示

5、结果。使用单因素方差分析(onewayANOVA)进行多组间比较，方差 不齐时，使用Welch法校正和Dunnett T3法检验组间差异。当P<0. 05时，认为差异有统计学意义。结果1. Transwell迁移实验评估 A549细胞迁移能力与Control组相比,PPF组,UTI+ PPF组、PPF-UTI组以及 UTI-PPF组A549细胞的迁移能力明显减弱，其细胞迁移抑制率分别为:41. 91% 63.97%、65.45%、65. 07%,其差异有统计学意义(P<0.05)。UTI组A549细胞的迁移能力稍弱于Control组，但其差异无统计学意义。与 PPF组相比,UTI+

6、PPF组、PPF-UTI组以及UTI-PPF组A549细胞的迁移能力减 弱更明显,其差异有统计学意义(P<0. 05) oUTI+PPF组、PPF-UTI组以及UTI-PPF组A549细胞的迁移能力无明显 差异。Control组与DMS0组之间差异无统计学意义。2. Transwell侵袭实验评估A549细胞侵袭能力与Control组相比,PPF 组,UTI+PPF组PPF-UTI组以及UTI-PPF组A549细胞的侵袭能力明显减弱， 其细胞侵袭抑制率分别为：34.81% 65.99%、67.61%、61.95%,其差异有统计学意 义(P<O. 05) o UTI组A549细胞的迁

7、移能力稍弱于Control组,但其差异无统 计学意义。与PPF组相比,UTI+PPF组、PPF-UTI组以及UTI-*PPF组A549细胞的侵袭 能力减弱更明显,其差异有统计学意义(P<0. 05) o UTI+ PPF组、PPF-UTI组 以及UTI-PPF组A549细胞的侵袭能力无明显差异。Control组与DMS0组之间差异无统计学意义。3. Western blot检测 E-cadherin 蛋白的表达与 Control 组相比,PPF 组、UTI+PPF 组、PPF-UTI 组、 UTI-PPF 组的 E-cadherin 蛋白表达量增加(P<0. 05) o与 PPF 组相比,UTI+PPF 组、PPF-UTI 组、UTI-*PPF 组的 E-cadherin 蛋白 表达最增加更明显，其差异有统计学意义(P<0.05)l：TI+PPF组PPF-*UTI组、 UTI-*PPF组的E-cadherin蛋白表达屋无明显差异。Control组、DMS0组和UTI组之间差异无统计学意义。结论1.临床浓度下， 丙泊酚可以抑制A549细胞迁移和侵袭，丙泊酚和乌司他丁联合使用效果更强。但是临床浓度的乌司他丁对A549细胞迁移和侵袭无明显抑制作用。2.临