临床微生物学标本的采集课件

1、临床微生物学标本的采集1 临床临床微生物学微生物学标本的采集标本的采集 临床微生物学标本的采集2 临床微生物检验流程示意临床微生物检验流程示意 临床标本临床标本 留取留取 环节一环节一 运送运送 实验室实验室 环节二环节二 分析前分析前 分析中分析中 标本合格？标本合格？ 环节三环节三 接种接种 培养培养 检测检测 门诊门诊 病房病房 不合格不合格 合格合格 环节四环节四 环节五环节五 分析后分析后 报告报告 环节六环节六 EQC IQC 培养基、冰箱培养基、冰箱 温箱、气体温箱、气体 直接检测直接检测 仪器设备、试剂仪器设备、试剂 EQA标本标本 标本合格标本合格 判定判定 SOP 对每个环

2、节进行控制，构成质量保证体系对每个环节进行控制，构成质量保证体系 + 临床微生物学标本的采集3 失误的不同分布 分析前阶段约占总失误的55%，分析 阶段约占总失误的4%，分析后阶段 约占总失误的41%。 4% 41%55% 临床微生物学标本的采集4 标本质量的好坏直接影响诊断结 果的正误，因此在标本采集、送 检、保存等各个环节都要规范操 作，严格控制，是确保实验结果 准确可靠的前提。 临床微生物学标本的采集5 标本采集的一般原则： 1.早期采集：采集时间最好是病 程早期、急性期或症状典型时， 而且必须在使用抗生素或其他抗 菌药物之前采集。 临床微生物学标本的采集6 2.无菌采集：采集的标本应无

3、外源性 污染。在采集血液、脑脊液、胸腔 积液、关节液等无菌标本时，应注 意对局部及周围皮肤的消毒，严格 进行无菌操作；对于与外界相通的 腔道，如窦道标本应由窦道底部取 活组织检查，而不应从窦道口取标 本，以免受皮肤表面正常菌群的污 染，造成混淆和误诊； 临床微生物学标本的采集7 采集的标本均应盛于无菌容器内， 盛标本的容器须先经高压灭菌、 煮沸、干热等物理方法灭菌，或 用一次性无菌容器，而不能用消 毒剂或酸类处理。 临床微生物学标本的采集8 3.根据目的菌的特性用不同的方法采 集：厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌， 以及L型菌采用的方法不同。如尿液 标本，疑为厌氧菌感染时，应以无 菌注射器从耻骨上缘行

4、膀胱穿刺术 抽取；若怀疑是需氧或兼性厌氧菌 的感染，可通过自然导尿获取标本。 临床微生物学标本的采集9 4.采集适量标本：采集量不应过 少，而且要有代表性，同时有些 标本还要注意在不同时间采集不 同部位标本。如伤寒副伤寒患者， 发病的第1周应采集血液，第2周 应采集粪便和尿液，否则影响细 菌检出率。 临床微生物学标本的采集10 5.安全采集：采集标本时不仅要 防止皮肤和黏膜正常菌群对标本 的污染，同时也要注意安全，防 止传播和自身感染。 临床微生物学标本的采集11 一 上呼吸道标本 临床微生物学标本的采集12 标本采集方法 ： 嘱患者先用清水漱口，由检查者 将其舌外拉使悬雍垂尽可能向外 牵引,

5、 用压舌板将舌向下向外压， 用无菌棉拭子越过舌根到咽后壁 或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次然 后送检，拭子应避免触及舌、口 腔粘膜和唾液。 临床微生物学标本的采集13 临床微生物学标本的采集14 标本采集注意事项： 1 采集时间：应于抗生素应用之 前。时间上可无严格限制，但咽 部是呼吸和食物的通路，应晨起 后采集为佳。 2 送检：应立即送检。 临床微生物学标本的采集15 二 下呼吸道标本 临床微生物学标本的采集16 标本质量 脓痰脓痰 粘液样痰粘液样痰 唾液唾液oror诱导痰诱导痰 (?)(?) 血痰血痰 临床微生物学标本的采集17 用革兰氏染色来评估用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格呼吸道标

6、本是否合格 临床微生物学标本的采集18 痰标本痰标本1010鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞/ /每低倍视野每低倍视野= =拒收拒收 临床微生物学标本的采集19 白细胞25个/每低倍视野，鳞状上 皮细胞105/ml、革兰阳性球菌 104/ml、真菌103/ml时有意义， 有3种或者3种以上生长时可怀疑 污染。如病人有发热伴随症状可 同时做血培养。 临床微生物学标本的采集35 四 大便标本 临床微生物学标本的采集36 标本的采集方法 1 自然排便采集法：自然排便后， 挑取有脓血、粘液部位的粪便2- 3g，液状粪便取絮状物1-3ml盛 于无菌的容器中送检。 临床微生物学标本的采集37 2 直肠拭子法：适于

7、排便困难者 或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周 围洗净，用无菌盐水、保存液或 增菌液湿润的无菌棉拭子插入肛 门,成人约4-5cm，儿童约2-3cm， 与直肠粘膜表面接触，轻轻转动, 放灭菌试管内送检。 临床微生物学标本的采集38 标本采集注意事项 1 采集时间：应在急性期采样， 以提高检出率，最好在用药前。 2 送检：要采集新鲜标本立即送 检。 临床微生物学标本的采集39 五 血液标本 临床微生物学标本的采集40 关于血培养指征 只有在发热时，才需要进行血培养。 想采就采想采就采 临床微生物学标本的采集41 怀疑患者有血流感染的症状有： 不明原因的发烧(38)或体温过低( 36) 白细胞增多（100

8、00/ul） 粒细胞减少（1000/ul） 严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎， 肾盂肾炎，腹部术后感染等) 休克、寒颤、僵直、心率异常加快、低血压 或高血压、呼吸频率加快等。 临床微生物学标本的采集42 关于采血时机 何时采血进行血培养，无特殊时间要求。 临床微生物学标本的采集43 细菌浓度细菌浓度 体温体温 血培养采血时机 时间 (分钟) 0 3060 临床微生物学标本的采集44 关于采血套数及部位 为减轻患者痛苦，只从一个穿 刺部位采一份血液标本即可。 临床微生物学标本的采集45 基本注意事项： 成人“一套” 血培养应该包括需氧瓶和 厌氧瓶各一个，也叫“一份” 注意：一次穿刺采血，算

9、“一套”，采 集第二套应从另一个穿刺点获得。 儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个 部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培 养。 临床微生物学标本的采集46 采血套数 临床微生物学标本的采集47 2 23 3套血培养，有助于污染的判断。套血培养，有助于污染的判断。 采集采集1 1套无法判套无法判 断是病原菌断是病原菌 还是污染菌。还是污染菌。 临床微生物学标本的采集48 关于采血量 每瓶采集多少血液无特殊要求 临床微生物学标本的采集49 采血量(ml)与检出率的关系 血培养物每增加一毫升，真性菌血症血培养物每增加一毫升，真性菌血症 成年人微生物的检出率增加成年人微生物的检出率增加3 但并非越多越好，

10、超过一定数量的采血量会稀释培但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培 养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质 （补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例 为为1：51：10 临床微生物学标本的采集50 标本的采集方法 防止皮肤寄生菌或环境微生物引起 的污染是血培养的关键问题，采血 前严格执行消毒程序是十分重要的。 临床微生物学标本的采集51 1 皮肤消毒程序： 严格按以下三步法进行： (1) 70%酒精擦拭静脉穿刺部位30s 以上。 (2) 用碘酊或聚维酮碘（碘伏）棉签消 毒皮肤，1

11、-2碘酊作用30s 或聚维酮碘 作用60s，从穿刺点向外画圈消毒，至消 毒区域直径达3cm以上。 (3) 70酒精脱碘。 对碘过敏的病人只能用70%酒精消毒，消 毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺 采血。 临床微生物学标本的采集52 2 培养瓶消毒程序 (1) 用70酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。 (2) 酒精作用60s。 (3) 在血液注入血培养瓶之前，用无菌 纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒 精，然后注入血液。 临床微生物学标本的采集53 3 培养瓶接种程序 抽取血液后，不要换针头，直接 注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀， 以防血液凝固。如果同时作需氧 和厌氧培养，应先将标本接种到 厌氧瓶中

12、，然后再注入需氧瓶， 防止将空气注入厌氧瓶中。 临床微生物学标本的采集54 标本采集注意事项 1 血培养采集的时间和频率 (1) 采血培养应尽量在抗菌药物使用 之前，在24h 内采集2-3 份血培养 （一次静脉采血注入到多个培养瓶 中应视为单份血培养），每次2 瓶。 研究已证实，2-3 份血培养足以检测 所有的菌血症和真菌血症。 临床微生物学标本的采集55 (2) 入院前2周内接受抗菌药物治 疗的患者，可连续3 天采集，每 天采集2 份， (3) 对间歇性寒战或发热的患者， 应在寒战或体温高峰到来之前 0.5h采集血液，或于寒战或发热 后1h 采集，因为发热时血液中可 能没有细菌。 临床微生物

13、学标本的采集56 (4) 可疑为急性原发性菌血症、真菌 血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或 肺炎的患者，应在不同部位采集2-3 份血培养。 (5) 不明原因发热，如隐性脓肿、伤 寒热和波浪热，先采集2-3 份血标本， 24-36h 后估计体温升高之前，再采 集2份以上。 临床微生物学标本的采集57 (6) 可疑为菌血症或真菌血症， 但血培养持续阴性，应改变血培 养方法，选择其它种类的培养瓶， 如高渗培养瓶，中和抗生素培养 瓶，结核菌培养瓶等，以获得罕 见的或苛氧的微生物。 临床微生物学标本的采集58 (7) 可疑为细菌性心内膜炎者， 在1-2h 内多部位采集3 份血标本， 如果24h阴性，再采取3

14、 份以上 的血标本。 临床微生物学标本的采集59 2 采血量 成人：推荐每个血培养瓶应加的 血量为5-10ml，血液和肉汤比为 1：5-10（体积：体积）。骨髓 采量一般为1-2ml。 儿童：因很难获得大量的血液， 一般静脉采血3-5ml 用于血培养。 临床微生物学标本的采集60 标本的保存 接种标本后应立即送检，如不能 立即送检，室温保存，但不能超 过12小时。切勿冷藏，因为某些 苛氧菌可在冰箱温度中死亡，而 使培养阳性率下降。在运往实验 室的途中如果天气寒冷，应采取 一定的保温措施。 临床微生物学标本的采集61 六 脑脊液 临床微生物学标本的采集62 标本的采集方法 用腰穿的方法采集脑脊液

15、，如果 用于检测细菌或病毒，脑脊液量 应大于或等于 1ml，如果用于检 测真菌或抗酸杆菌，脑脊液量应 大于或等于 2ml。标本采集容器 为无菌试管或小瓶。 临床微生物学标本的采集63 标本采集注意事项 1 采集时间：应立即采集，且最好于 抗生素使用之前。 2 送检：穿刺过程中要严格无菌操作， 防止污染。收集标本后，常温下 15 分钟内送到实验室。如不能可在25- 37度保存，保存时间应小于2小时， 绝不可冷藏。如只做培养可直接注 入血培养瓶内，及时送检。 临床微生物学标本的采集64 脑脊液标本不可放冰箱保存，否 则会使一些细菌漏检（如脑膜炎 奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆 菌） 。标本运送过程中必

16、须保 证其安全，防止溢出，避免细菌 污染。 临床微生物学标本的采集65 七 胸腹水 胆汁 心包液 关节液 鞘膜积液 穿刺液 临床微生物学标本的采集66 标本的采集方法 1 首先用 2%碘酊消毒穿刺要通 过的皮肤。 2 用针穿刺法或外科手术引流法 采集标本，然后放入无菌试管或 小瓶内。为防止凝固，应在试管 中先加入灭菌肝素。 3 尽可能采取更多的液体，至少 为 1ml。 临床微生物学标本的采集67 标本采集注意事项 1 采集时间：怀疑感染存在，应尽 早采集，一般在患者使用抗菌药物 之前或停止用药后 1-2 日采集。 2 送检：应在常温下 15 分钟内送到 实验室，在常温下可保存 24 小时。 如

17、果做真菌培养，只能放 4保存。 临床微生物学标本的采集68 3 如怀疑厌氧菌感染则保证不被 正常菌群污染，并尽量避免接触 空气，用针筒抽取抽出后排出一 滴标本于酒精棉球上，然后用橡 皮塞封住针头，及时送检。 临床微生物学标本的采集69 八 生殖道标本 临床微生物学标本的采集70 应根据感染的部位和可能的病原 体决定用于病原学诊断的标本种 类、采集部位和采集方法等。由 于正常菌群的存在，所以在采集 标本时应注意尽量减少和避免正 常菌群的污染。 临床微生物学标本的采集71 1.生殖器溃疡标本：用无菌盐水 清洗溃疡面并用无菌手术刀清除 坏死组织和覆盖的分泌物，暴露 出溃疡基底；待渗出物积聚较明 显时

18、，轻压溃疡基地并用拭子或 吸管采集渗出物；疑有肉芽肿荚 膜杆菌感染时可在溃疡边缘取肉 芽肿组织标本。 临床微生物学标本的采集72 2.宫颈标本：用无菌生理盐水湿润窥阴 器（不用润滑油）暴露宫颈；用拭子清 除阴道和宫颈局部分泌物，弃拭子；轻 压宫颈以使宫颈分泌物流出，用拭子采 集分泌物或用专用拭子插入宫颈内口1- 2cm，旋转数周后停留20s，以充分吸 附分泌物，拔出拭子，注意不要将拭子 接触阴道壁。 临床微生物学标本的采集73 3.阴道标本：先用拭子清除阴道 表面分泌物，弃拭子；在后穹窿 或阴道上端用无菌拭子或吸管采 集黏膜分泌物；B群链球菌筛查 培养应在阴道口（和/或直肠肛门 部位）采集拭子

19、标本。 临床微生物学标本的采集74 4.子宫内膜标本：用无菌生理盐 水湿润窥阴器（不用润滑油）； 用拭子清除阴道和宫颈局部分泌 物，弃拭子；用双腔的真空吸引 器吸取标本或用拭子取子宫内膜 标本，注意防止宫颈和阴道正常 菌群的污染。 临床微生物学标本的采集75 5.腹腔炎性渗出物标本：通过后 穹隆穿刺术获得；亦可直接在手 术过程中获得。 6.前庭大腺标本：用碘伏等无刺 激性消毒液消毒皮肤，急性感染 用拭子采取腺管分泌物；脓肿形 成时，用注射器吸取脓液。 临床微生物学标本的采集76 7.尿道分泌物：标本采集应最少在病 人排尿1h后进行，先用无菌拭子清 除尿道口分泌物，用另一无菌拭子 采集尿道分泌物

20、，分泌物过少时女 性可经阴道按摩尿道，男性可从阴 茎的腹面向龟头方向按摩，使分泌 物溢出。如不能获得尿道分泌物， 可将尿道拭子插入尿道约2cm左右， 轻轻转动后取出。 临床微生物学标本的采集77 8.前列腺液：被检者前1周内停服抗 生素，外阴消毒后，留取排出的首 段尿液10ml为第一份标本，继续排 尿200ml后，留取10ml尿液为第二 份标本，即行前列腺按摩，收集按 摩液为前列腺液，随之立即排尿， 收集首段尿液10ml为第三份标本。4 份标本均送细菌培养、菌落计数和 药敏试验。 临床微生物学标本的采集78 9.淋球菌培养标本应立即送检或床旁 接种，勿放冰箱保存。淋病奈瑟菌 感染如能同时采集直

21、肠标本会增加 阳性率，其采集方法为将拭子插入 肛管2.5cm左右，穿过肛门括约肌后 转动拭子，停留10-30s，取出的粪 便标本不能受到污染。如有尿道症 状时可采集尿道分泌物。 临床微生物学标本的采集79 10.支原体：男性：用细的无菌棉拭 子沾取无菌盐水少许深入尿道口内 2.5-3cm。女性：用无菌拭子抹去宫 颈口粘液，然后用新的拭子插入宫 颈管l-2cm旋转取材。支原体培养取 分泌物时，持拭子用力擦下尽可能 多的细胞。尚可用前列腺液、精液、 尿液离心沉淀物作标本。支原体对 干、热抵抗力差，标本采集后应尽 快接种支原体运送培养基送检。 临床微生物学标本的采集80 九 分泌物标本 临床微生物学

22、标本的采集81 1.眼分泌物采集：先用无菌生理 盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭 干，再用无菌棉拭子采集分泌物。 2.耳、鼻咽分泌物采集：直接用 拭子在病灶部位擦拭数次，切勿 接触周围粘膜或皮肤。 临床微生物学标本的采集82 3.伤口、创口、开放性感染、溃 破的化脓灶：感染部位与外界相 通，先用无菌生理盐水冲洗其表 面分泌物和杂菌，然后用灭菌棉 拭子擦取病灶深部新生组织边缘 的分泌物。 临床微生物学标本的采集83 4.脓肿：抽吸前用无菌生理盐水 冲去表面分泌物，以避免污染。 闭合性脓肿抽吸脓肿壁，开放性 伤口尽量抽吸深部脓液送检。深 部脓肿常由包括厌氧菌在内的混 合细菌感染所致，应同时作厌氧 菌培

23、养。 临床微生物学标本的采集84 5 烧伤标本：以无菌棉拭子直接 采取多个部位创面的脓汁分泌物 放入无菌试管中及时送检。 临床微生物学标本的采集85 十 静脉导管标本 临床微生物学标本的采集86 静脉导管的微生物学培养主要用 于检测血流感染是否与导管相关 。导管相关性血流感染（CABSI ）的定义为：患者在留置导管期 间或者拔除导管48小时内发生的 原发性，且与其他部位存在的感 染无关的血流感染。 临床微生物学标本的采集87 导管相关性血流感染的诊断标准： 参照美国感染病协会、疾病控制中心 发 布的血管内导管相关感染处理指南 (1)具有血管内导管的患者； (2)具有明确的临床感染表现，如发热、

24、 寒战； (3)不具有其他明确的感染灶； (4)外周血细菌或真菌培养至少1次(+)； 临床微生物学标本的采集88 (5)从导管片段和血标本分离出同一病原 微生物，包括以下几种情况之一： 导管远端部分半定量培养15个菌落 或定量培100个菌落； 从中心静脉导管得到血标本细菌定量 外周静脉血标本5倍； 从中心静脉导管得到血标本定性培养 呈(+)时间较外周静脉血标本早2h以上。 临床微生物学标本的采集89 临床微生物学标本的采集90 1、采集方法 （1）常规导管部位皮肤消毒。 （2）无菌方法从病人体内拔出 静脉导管，剪下导管尖端5cm， 放入无菌瓶中。 （3）立即（15min内）送检，避 免标本干燥。 临床微生物学标本的采集91 2、接种方法 （1）半定量培养法：用无菌镊子将 5cm