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1、实验四 细菌抹片的制备及染色实验班级： 2017 级牧医高职（动物微生物）指导老师：陶波实训地点：实训室 207时间： 2018年 6月【目的要求】1. 掌握细菌抹片的制备方法和几种常用的染色方法。2. 认识革兰氏染色和瑞特氏染色的反应特性。【实验材料】试剂用品：载玻片、接种棒、酒精灯、吸水纸、生理盐水、染色 液等。菌种：羊、兔粪便便中提取培养的细菌。【实验内容】一、细菌涂片的制备1. 载玻片准备 载玻片应清晰透明，如有残余油渍，可用 95%酒精清 洗。2. 抹片 根据材料情况不同，抹片方法也有差异。液体材料（如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等）可直接用灭 菌接种环取一环材料，于玻片中央均匀涂

2、布适当大小或可采用推片 法。非液体材料（菌落、脓、粪便）应先用灭菌接种环取少量生理盐 水或蒸馏水，置于玻片中央，然后用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂抹成适当大小的薄层组织脏器材料可先用镊子夹持中部，然后以灭菌或洁净剪刀取一 小块，夹出后将其新鲜切面在玻片上触片或涂抹成薄层。3. 干燥 上述涂片应让其自然干燥或适当烘干处理。4. 固定 有两类固定方法火焰固定法： 将干燥好的抹片使其涂抹面向上， 以其背面在 酒精灯外焰来回拖过数次，略作加热进行固定。化学固定法：血液、组织脏器等抹片要做姬姆萨染色，不同 火焰固定，可将干燥后的抹片滴加数滴甲醇其实作用 23min 后自然 干燥进行固定（瑞

3、士染色可不做甲醇固定） 。二、几种常用的染色方法（一）姬姆萨染色 将足量的姬姆萨溶液（或将姬姆萨原液稀释） 滴加到抹片上，或将抹片浸入盛有姬姆萨染液的染缸中浸染 30min 至数小时，取出后水洗，吸干水分后镜检。（二）瑞特氏染色 瑞氏染料是碱性美蓝与酸性伊红混合而成的染 料，当溶于甲醇后立即发生分离，分解成酸性和碱性两种染料。由于 细菌菌体蛋白偏酸性，菌体带负电（菌体蛋白等电点多在 pH25）， 被染成蓝色。 在以固定好的涂片或触片上滴加足量的瑞氏染液， 染色 35min 后水洗，吸干水分后镜检（如染色不理想可重复几次） 。（三）革兰氏染色1.在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫溶液， 经 12min , 水洗。2滴加碘液于抹片脱色，经1mi n 2min，水洗。3. 加95%酒精于

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