白细胞血小板配血试验

1、免疫血液学 -白细胞 血小板 输血前交叉配血试验 一、人类白细胞抗原 人类白细胞抗原代表个体特异性人类白细胞抗原代表个体特异性 与移植排斥有关的抗原称为与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或移植抗原组织相容性抗原或移植抗原-MHS-MHS 编码编码MHSMHS的基因组称为的基因组称为主要组织相容性复合物主要组织相容性复合物(MHC)(MHC) 人类的人类的MHCMHC是首先在白细胞上发现的，称为是首先在白细胞上发现的，称为人类白细胞抗原人类白细胞抗原(human leukocyte antigen(human leukocyte antigen， HLA)HLA) HLA的研究历史 最早发现

2、人类白细胞抗原者为最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954Dausset-1954年年 HLAHLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。不仅仅是白细胞特异性同种抗原。 它是分布广泛的组织抗原。它是分布广泛的组织抗原。 HLA的分型命名 血清学分型命名血清学分型命名 具有临床意义的具有临床意义的HLAHLA基因有基因有A A、B B、C C、DRDR、DQDQ、DPDP等位点等位点(Loci)(Loci)，每个位点又有若干，每个位点又有若干 等位基因，这些基因的产物便是等位基因，这些基因的产物便是HLAHLA抗原。抗原。 临床意义比较大的临床意义比较大的HLA-AHLA-A、B B、C C称

3、为称为类抗原类抗原 HLA-DRHLA-DR、DQDQ、DPDP称为称为类抗原。类抗原。 HLA的遗传 单体型遗传单体型遗传 存在基因重组存在基因重组 多态性现象多态性现象 连锁不平衡连锁不平衡 HLA抗体及抗体检 测 临床上临床上HLAHLA抗体多由抗体多由妊娠、妊娠、 输血或器官移植等免疫产输血或器官移植等免疫产 生生 HLA在医学中的应 用 一、一、HLAHLA与输血与输血 HLAHLA与非溶血性输血反应与非溶血性输血反应 HLAHLA与血小板输注与血小板输注 二、二、HLAHLA与器官移植与器官移植 ( (一一) )肾移植肾移植 ( (二二) )骨髓移植骨髓移植 三、三、HLAHLA与

4、亲子鉴定与亲子鉴定 二、血小板血型 u一类是与其他细胞表面或组织共有的一类是与其他细胞表面或组织共有的 抗原，称抗原，称血小板相关抗原血小板相关抗原 u另一类为另一类为血小板特异性抗原血小板特异性抗原 血小板血型 u相关抗原：相关抗原：主要与红细胞的主要与红细胞的ABOABO血型系统以及人类白细胞抗原血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)(HLA)有关有关 u特异性抗原：特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗 传多态性，在其他细胞和组织上不能发现传多态性，在其他细胞和组织上不能发现 血小板血型 u血小板表面存在红细胞血小板

5、表面存在红细胞ABOABO系统系统的的A A抗原和抗原和B B抗原抗原, ,可能是从可能是从血浆中吸附血浆中吸附上的。上的。 u是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中 u在我国，通常进行在我国，通常进行ABOABO同型血小板输血同型血小板输血 配合性血小板输注 ABOABO同型同型 血小板抗体的筛选血小板抗体的筛选 交叉配合试验：确保供受体的血小交叉配合试验：确保供受体的血小 板型和板型和HLAHLA型的配合型的配合 血小板血型 血小板特异性抗原血小板特异性抗原 n 具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构

6、中的一部分 n 血小板特异性抗原有血小板特异性抗原有6 6个血型系统个血型系统2424个抗原，正式命名为个抗原，正式命名为HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、 HPA-3HPA-3、HPA-4HPA-4、HPA-5HPA-5、HPA-15HPA-15 血小板血型的临床意义 一一. .血小板输注无效性血小板输注无效性(PTR)(PTR) 二二. .输血后紫癜输血后紫癜(PTP)(PTP) 三三. .新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)(NAITP) 四. .血小板的自身免疫作用血小板的自身免疫作用-特发性血小板减少性紫癜特发性血小板减少性紫癜(

7、(简称简称ITP)ITP) 血小板同种抗体与输 血 1.ABO1.ABO血型的选择血型的选择 一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好 输注输注ABOABO血型配合的血小板血型配合的血小板 2 2RhRh血型的选择血型的选择 D D阴性的患者，最好要避免用阴性的患者，最好要避免用D D阳性献血者的阳性献血者的 浓缩血小板。对育龄妇女可以注射浓缩血小板。对育龄妇女可以注射RhRh免疫球蛋免疫球蛋 白白 三、输血前免疫血液学检查 目的:供者与患者的血液 输血前免疫血液学检查 一、标本采集一、标本采集 二、红细胞悬液的配制二、红细胞悬液的配制 三、标本的保存三、标本的

8、保存 一、标本采集一、标本采集 1 1红细胞标本红细胞标本-ACD-ACD或或CPDCPD、(Na(Na2 2-EDTA)-EDTA)抗凝静脉血抗凝静脉血 少数患者有一种自身抗体少数患者有一种自身抗体-不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本 2 2血清标本血清标本 一般实验避免使用血浆一般实验避免使用血浆 配血试验用血清配血试验用血清不超过不超过7272小时小时 1 1、红细胞悬液常用浓度有、红细胞悬液常用浓度有2 2、5 5和和1010 2 2、2 2的悬液一般用于滴定抗体效价，的悬液一般用于滴定抗体效价，5 5的悬液常用于血型鉴定和交叉配血试验，的悬液常用于血型鉴

9、定和交叉配血试验， 1010的悬液则用于测定抗体的亲合力。的悬液则用于测定抗体的亲合力。 三、标本的保存三、标本的保存 1 1血清标本血清标本 不稀释的血清标本如加有防腐剂可在不稀释的血清标本如加有防腐剂可在44保存数月保存数月, ,在一在一2020以下可以下可 保存数年保存数年 如用生理盐水稀释的血清只限当天使用如用生理盐水稀释的血清只限当天使用 2 2红细胞标本红细胞标本 一般试验用的凝血标本要在一般试验用的凝血标本要在5 5天之内使用，以不溶血为准。如用保天之内使用，以不溶血为准。如用保 存液可保存存液可保存3 3周周 用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用用盐水配制的红细胞悬液只能在当天

10、使用 供受双方ABO、Rh血型鉴定 ABO血型正反定型 Rh血型鉴定 试管法 抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。 常见于多次输血的人群 患者血清+试剂筛选红细胞 盐水介质 聚凝胺介质 抗人球蛋白介质 受者血清+供者红细胞 受者红细胞+供者血清 方法 主侧 次侧 盐水介质 聚凝胺介质 抗人球蛋白介质 （1）低离子聚凝胺交叉配血技术 原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产 生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能 引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺 凝集，则凝集不可逆。 1 红细胞间有一定间 距

11、2 加入聚凝胺后，可以 缩短红细胞之间的距离， 使其非特异性凝集 3 加入枸橼酸钠，可以 中和聚凝胺 4 红细胞的非特异性 凝集消失 聚凝胺枸橼酸钠 1 红细胞上已有不完 全抗体致敏 2 加入聚凝胺后，缩短红 细胞之间的距离，让不完 全抗体可以同时与两个红 细胞结合使其特异性凝集 3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺 4 由于不完全抗体的 结合，红细胞的特异 性凝集不消失 聚凝胺枸橼酸钠 不完全抗体 试验分步原理 血清 红细胞悬液 加入LIM 混合液 Polybrene 受体 血型抗原 I g G 抗 体 迅速致敏 试验分步原理 Polybrene分子连 接到红细胞上 加入 Polybrene 试验分步

12、原 理 离心 Polybrene拉近 红细胞间的距 离并造成凝集 1个IgG分子 同时连接两 个红细胞 试验分步原 理 加入重悬液减 弱了Polybrene 的作用 加重悬液 试验分步原理 已被血型抗体 致敏的红细胞 不会散开 阳性结果 试验分步原理 未被血型抗体致敏 的红细胞很快散开 阴性结果 注意事项 按比例加样 致敏时间 观察非特异性凝集 观察结果 关于冷凝集 聚凝胺方法的特点 灵敏：灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。 速度快：速度快：实验时间5分钟左右。 准确：准确：准确度高于酶试验。 不适合于不适合于Kell系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。 操作要求较高操作

13、要求较高 （2）微柱凝胶技术）微柱凝胶技术 微柱凝胶技术微柱凝胶技术 凝胶技术的原理凝胶技术的原理 反应 室 外管壁 反 应 室 底 孔 内套 管壁 凝胶或 玻璃珠 亲和凝 胶 试剂或 盐水 特殊粘液 凝胶技术的原理：凝胶技术的原理： A、反应室：反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。 B、试剂或盐水层：试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血 清分离并与该层液体中的试剂反应。清分离并与该层液体中的试剂反应。 C、粘液粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与亲

14、和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层试剂或盐水层”相同。相同。 1 1）敏感：）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。 2 2）结果可保存）结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。 3 3）操作技术要求较低：）操作技术要求较低：凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都 有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。 4)4)无需洗涤的抗球蛋白试验：无

15、需洗涤的抗球蛋白试验： 优点： 缺点：缺点： 凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。 高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/3001/300的库血直抗阳性。的库血直抗阳性。 2不完全抗体可以结合在红细 胞表面,但是不能和两个红细 胞同时结合（致敏）。 3加入抗人球蛋白 1红细胞彼此之间有一定的间距 4抗人球蛋白可以同时和两 个不完全抗体的FC段结合， 从而把红细胞连接在一起。 1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体) 2.加入供者血小板 3.试剂红细胞和血小板特异性结合 4.加入受者的血清,如有抗血小

16、 板抗体,则和血小板发生特异性 结合 5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗 血小板抗体,导致试剂红细胞凝 集。 （4）血小板配血实验原理示意图（阳性） 1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体) 2.加入供者血小板 3.试剂红细胞和血小板特异性结合 4.加入受者的血清,如血清中无 抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗 人球蛋白不发生特异性结合， 试剂红细胞仍呈单个分布。 血小板配血实验原理示意图（阴性反应） HLA的研究历史 最早发现人类白细胞抗原者为最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954Dausset-1954年年 HLAHLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。不仅仅是白细胞特异性同种抗原。 它是分布

17、广泛的组织抗原。它是分布广泛的组织抗原。 配合性血小板输注 ABOABO同型同型 血小板抗体的筛选血小板抗体的筛选 交叉配合试验：确保供受体的血小交叉配合试验：确保供受体的血小 板型和板型和HLAHLA型的配合型的配合 血小板同种抗体与输 血 1.ABO1.ABO血型的选择血型的选择 一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好 输注输注ABOABO血型配合的血小板血型配合的血小板 2 2RhRh血型的选择血型的选择 D D阴性的患者，最好要避免用阴性的患者，最好要避免用D D阳性献血者的阳性献血者的 浓缩血小板。对育龄妇女可以注射浓缩血小板。对育龄妇女可以注射RhRh免疫球蛋免疫球蛋 白白 一、标本采集一、标本采集 1 1红细胞标本红细胞标本-ACD-ACD或或CPDCPD、(Na(Na2 2-EDTA)-EDT