临床基因扩增试验室建设方案

1、临床基因扩增实验室建设方案1、概述临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验新型冠状病 毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检 测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测岀一 些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法 可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快 捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，己广泛应用于医 院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。新型冠状病毒(2019-nCoV)是人类分离的第七类冠状病毒。该 病毒属于B属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径 60-140nnio其基因特征

2、与SARS-CoV和MERS-CoV有明显区别。目 前研究显示与蝙蝠SARS样冠状病毒(bat-SL-CoVZC45)同源性达 S5%以上。病毒对紫外线和热敏感，56度30分钟、乙瞇、75%乙醇、 含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。基于目前 的流行病学调查和研究结果，新型冠状病毒潜伏期为1-14天，多为 3-7天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可 能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封 闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的 可能，其他传播途径待明确；人群普遍易感。2020年01月20日国家卫健委公告：将新型冠状病

3、毒感染的肺炎纳入中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病，并采取 甲类传染病的预防、控制措施。并纳入中华人民共和国国境卫生检 疫法规定的检疫传染病管理。实验活动暂按第二类病原微生物进行 管理。因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生 物安全与防护以及质量控制等方而满足并符合国家相关技术规范要 求。因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理的实 验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的 建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性 起到至关重要的作用O本方案主要从临床基因扩增检验实验室的平面 布局,空调通风系统设计、气流控制和污染的防

4、制几个方面对实验室 设计中的主要特点进行了阐述。临床基因扩增检验实验室设计的核心 问题是如何避免污染。因此,实验室的平而布局、空调通风系统设计、 气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别 进说明。2、FCR实验室平面布局临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂 贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产 物分析区，同时为了符合新冠实验检测需要增加独立衣帽间方便更换 防护装备。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方 向进行，即只能在衣帽间更换防护服后从试剂准备区一标本制备区一 基因扩增区一扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传

5、递应通过传递窗进行。3、实验室空调通风系统设计及压力控制FCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间 交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控 制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。4、实验室建设及设备4.1实验室分区功能分区名称实验室功能实验室专业要求衣帽间存储防护物质和实验前更换防护无特殊要求试剂准备区试剂的分装和扩增反应混合液的 准备，以及离心管、吸头等消耗品 的贮存和准备。应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求样本制备区核酸（RXA、DNA）提取、贮存及制备工作应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求扩增区c

6、DNA合成、DNA扩增应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求产物分析区基因扩增产物分析应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求4.2、实验室设计要求（仅供参考）实验室名使用面通风噪声温湿度相对外界大不间断大型平均照称积5）要求(dB)气压（Pa）电源落地设备度(lx)虹也代码衣帽间10试剂准备区2012 次/hM6018 27950% 70%缓冲间10主实验室5有500样本制备区5012 次/hM6018 27 C50% 70%缓冲间5主实验室-5有S00扩增区2012 次/hM6018 27 CS0% 70%缓冲间5主实验室-10有（荧光PCR 仪）有3

7、00产物分析区5012 次/hM6018C2C50%20%缓冲间5主实验室15有（杂交仪）有5004.3实验室设备要求序号设备名称型号配备数量备注1空气消毒机需保证标本制备区1台； 有条件PCR每个分区各1台2移动式紫外灯土台需保证四个分区各1台有条件每个缓冲间各1台5超净工作台1台试剂准备区土微型离心机5 1需保证试剂准备区1台，扩增区1台，扩增区1台5振荡器可调速5 ：zr需保证试剂准备区1台，标本制备区1台，标本制备区生物安全柜里使用1台6生物安全柜1.5米全排双人，A2x B2均可2台标本制备区，有条件可根据提取通量及检测虽增加（至少1台）7全自动核酸提取仪1台标本制备区，有条件可根据

8、提取通虽:及检测虽增加S髙速离心机2 1标本制备区，需要保证标本制备区生物安全柜里使用1台虹也代码（建议采购Eppendorf品牌）9医用冰箱土台试剂准备区1台，标本制备区2台（英中1台 带锁），产物分析区1台 需具备-20度以下10多通道荧光仪96孔寸通道（具备CY5通道）1台扩增区1台，有条件可根据提取通量及检测量增加11移液器100-1000U12O-2OOU12-10uls套试剂准备区，标本制备区及产物分析区有条件可根据样本数选用八通道排枪12恒温水浴箱2 X、保证标本制备区1台（病毒火活处理，可使用恒温箱代替），产物分析区1台1S自动手消器S个标本制备间2个，标本制备间缓冲间1个14

9、-医废垃圾桶12个土分区及其缓冲间各1个，而新冠检测还需要保证标本制备区及其缓冲间多配1个，以区分髙压及未高压的医废垃圾15髙压灭菌锅2台自动，无需人工排气式：建议保证标本制备区1台16抽湿机（选用）根据实际实验室环境选用17耗材无RNA酶适量吸头（带滤芯）/八连管/EP18移液器10ul/50ul/200ul/lOOOul2/1/+/5根据标本疑可以对部分量程数虽增加5、实验室人员资质及配置经省（市）临检中心基因检测技术培训合格（持岗位合格证）；经 过省（市）疾控或其他相关部门的生物安全培训（培训合格）和具备 相应的实验技能；经PCR实验室内部的生物安全与操作规范培训与 考核合格。（要求具备PCR岗证）：高级职称1人以上、中级职称2人以 上、初级职称要求4人以上，标本接收员1人以上。6