辅酶Q10与拉贝洛尔联合用药对自发型高血压大鼠治疗效果的研究

1、开题报告：辅酶 Q10 抗脂质过氧化作用对SHR 大鼠高血压的防治研究2 级法文班徐呈兰晓曦庞文璟解轶声林盟菲孟晋方原吴贻明指导老师：李稻实验目的 ：探究、比较单用辅酶 Q10 以及辅酶 Q10 与拉贝洛尔协同作用对 SHR 大鼠的血压升高的抑制或降压的作用，并对辅酶 Q10 的降压作用机制进行初步探讨。实验意义 ：高血压是一种常见、多发病，原发性高血压的病因不详，但与遗传因素和环境因素密切相关，所以对高血压高危人群的防治工作尤为重要。新近发现脂质过氧化反应可能参与了高血压发生和发展的病理过程 9 。但也有报道认为， 辅酶 Q10 具有较好的抗脂质过氧化的作用 8 。本实验利用血压未达平台期的

2、 SHR 大鼠模拟高血压高危人群， 并初步研究辅酶 Q10 以及辅酶 Q10 与拉贝洛尔协同作用对高血压防治的效果，探索临床用药的新途径。技术路线：SHR 大鼠配对分组测血压、心率取血，冷冻保存实验组大鼠：CoQ10对照组大鼠：生理盐水15 天后肌肉注射拉贝洛尔，测血压、心率处死动物，取血，测指标，心脏称重数据分析、 讨论结果实验动物：大鼠 （雄性， 10 周龄，只， 随机分为： 对照组和实验组）动物来源：中国科学院动物实验中心实验器材 ：1B 型 RBP 大鼠血压计、i-STAT型血气电解质分析仪、725 型分光光度计、80-2 台式离心机、旋涡混匀器、水浴箱、研磨器、分析天平（ 0.1mg

3、）、可调式 Eppendorf 移液器、鼠台、量筒、试管、注射器、常用手术器材、保鲜薄膜等。检测试剂盒：丙二醛（ MDA ）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）超氧化物歧化酶（SOD）测试盒（南京建成生物工程研究所）一氧化氮（ NO ）测试盒（南京建成生物工程研究所）实验药品：生理盐水：作为安慰剂，上海第二医科大学病生教研室提供辅酶 Q10 胶囊：上海信谊制药公司拉贝洛尔：江苏天禾制药公司无水乙醇、冰醋酸用量：辅酶Q10 ：20mg/day服用 15 天。拉贝洛尔：小剂量具体用量在预实验后确定。实验方法与操作步骤： 12 只大鼠稳定两天，每天测一次血压（1B 型 RBP 大鼠血压计），使大鼠习

4、惯。根据大鼠血压配对后随机分成两组。（随机数法）两天后，眼球取血1.5 l 于试管。静置后离心（3000rpm10min ）取上层血清，再一次离心（ 5000rpm 5min ）取上清液，-20C 冷冻待用。实验组大鼠灌胃辅酶Q10（ 20mg/day）15 天，对照组大鼠灌胃安慰剂（生理盐水） 15 天。灌胃溶液自行于灌胃当天调配，灌胃液为20mg/3ml 生理盐水。每隔5 天测量并记录血压、心率。第 15 天，测完血压、心率后，肌肉注射拉贝洛尔（剂量待定），于 30min 后测量并记录血压和心率。乙醚麻醉动物，处死动物，称重。用大剪刀开胸，即刻用注射器从心脏抽血，将针头对准电极板注血口，注

5、入全血到标准刻度，盖上小盖，插入i-STAT 血液分析仪器，分析并记录血液中钾离子。最后再取血1.5ml 于试管中，血液静置后离心取上层血清，将15 天前冰冻的血清取出，化冻，两份血清一起做丙二醛、SOD、NO 检测（方法详见试剂盒说明书）并记录结果。取出心脏，清理、称重，计算：心重（g） /体重（ g）。运用配对T 检验的方法，对数据进行统计学分析。预期结果：1服药 15 天后，对照组和实验组大鼠平均血压有明显差异，说明辅酶Q10 对SHR大鼠有降压作用，推迟其血压达平台期的时间（统计学上有意义）。BHPRControlStudyControlStudyGroupGroupGroupGrou

6、p服用药物 15 天后，实验组对照组大鼠平均血压、心率比较（ n=6)2拉贝洛尔 +辅酶 Q 用药时， 可降低拉贝洛尔的剂量，达到降压效果，或延长药效维持时间。BP 0Study GroupControl Group15天后，肌注拉贝洛尔后，实验组对照组大鼠平均血压变化(n=6)3血清中 MDA 浓度：服用辅酶Q10 后明显下降； SOD 浓度：服用辅酶度：服用辅酶Q10 后明显升高。 证明辅酶Q10 的降压机制为抗脂质过氧化。Q10 后不变；NO浓K+SOD4.实验组和对照组由于血压不同而使心脏负荷不同，导致心肌增生程度不同，表现为心重不同。ACControl辅酶 Q10 实验组与对照组心重

7、 /体重值比较（XSD ）StudyControlStudy可能遇到的困难和问题及解决的措施Body Weight(kg)Heart Weight （ g)/Body Weight(kg)GroupHeart Weight （ g)GroupGroupGroupNOMDAStudy Group为使实验结果有统计学意义，我们将动物数量控制1 经费有限， 无法做大样本量的药效试验，为 12Control只，并进行Group配对，尽最大可能使结果有说服力。2 小组成员对实验操作经验不足，对于大鼠灌胃、测血压等操作比较陌生。但在动物房老师B的耐心指导帮助下，将会顺利完成实验计划，并对动物实验的基本技术

8、有感性认识。(n=6)ControlStudyControlStudyDGroupGroupGroupGroup实验组对照组大鼠血清生化指标(n=6)附录：辅酶 Q10 的国内外研究现状辅 酶Q(CoQ) ， 2,3- 二 甲 氧 -5- 甲 基 -6- 多 异 戊 二 烯 - 苯 醌(2,3-dimethoxy-5-methyl-6-multiprenyl-benzoquinone) 。 CoQ 不但存在于线粒体，还存在于浆膜和微粒体、溶酶体、高尔基体中。 CoQ 在细胞的生命过程中具有多方面的功能，在细胞中大都以还原型存在。辅酶 Q 有许多亚型， 人体中的存在的亚型称为辅酶Q10 ，（ 2

9、,3-二甲氧 -5-甲基 -6-癸异戊烯-1,4- 苯醌），存在于日常饮食中，并可在人体组织细胞中生物合成，是一种氧化还原酶，在电子转移和氧化磷酸化藕联机制中起作用。辅酶Q10 浓度的高低，在呼吸链和ATP 合成中起了关键作用1 。上世纪70 年代，在日本人就已经发现了辅酶Q10 对于高血压有一定的治疗意义。Yamagami 等人 2 研究了辅酶Q10 对于经去氧皮质酮（ deoxycorticosterone ）或盐水溶液 (saline)诱导的继发性高血压大鼠的作用，发现经过六周的给药后，其对于两者收缩压均有一定的降低作用；但是，不论是对照组、灌注辅酶Q10 组还是正常组的外周血管阻力均无

10、显著差异。此后，各国科学家都开始关注于辅酶Q10 的降压作用。 Folkers K 3 通过研究高血压病人服用辅酶Q10 后的各项指标变化，提出辅酶Q10 降低血压的机制是由于外周阻力的自我调节（autoregulation ），并且认为辅酶Q10 本身并无药理活性，而是在转录水平上增长辅酶Q10酶。Danysz A. 等人 4的实验 （先给 SHR 大鼠喂养一定时间的辅酶Q10 再注射普通剂量的尼群地平 /氨氯地平，分析血压变化）则揭示了辅酶Q10 不会增大最大降压幅度，但是能够延长药物对血压控制的时间 （延长两倍），因此提出辅酶Q10 的使用可以降低其他降压药的使用频率。而 Rosenfe

11、ldt F.5 也提出将辅酶Q10 作为一种治疗高血压的辅助药。在我国，关于辅酶Q10 的研究还比较少，但是也已经有人6 得出了贝那普利（血管紧张素转换酶抑制剂）联用辅酶Q10 治疗原发性高血压比单用贝那普利效果好的结论。另外，纵观其他的文献，还能得出以下结论：Q10 对正常大鼠没有降压作用。在不同的高血压动物模型中，口服辅酶Q10 对抑制血压升高或降低血压有效，但即便服用Q10 ，血压仍比同类正常动物高20 到 30mmHg 。 Q10 的降压作用表现在长期反复服药之后，在急性实验中即使用量高达100mg/kg 单剂量服用后也无效果。 SHR 大鼠模型中，服用（ 10mg/kg）Q10 对收

12、缩压 180mmHg 的大鼠无降压作用，但对血压更高的大鼠有明显作用。300mg 辅酶 Q10 的摄入量对人体无毒性作用。此外， CoQ10 有抗脂质过氧化的作用，能对细胞产生保护作用7 。其可能的机制为8 ：（ 1）CoQH 2 与 ADP-perferryl ion作用ADP-Fe3+-2+ H 2O2 + CoQO2 + CoQH 2 ADP-Fe(2 ) CoQH 2 直接清除 O2-+ O2 + CoQ2 O2 + CoQH 2 H 2O2(3 ) CoQH 2 脂自由基或脂过氧基反应2L + CoQH 2 2LH + CoQ2LOO + CoQH 2 2LOOH + CoQ氧自由基

13、能攻击生物膜磷脂中的多不饱和脂肪酸(PUFA) 引发脂质过氧化作用，并形成脂质过氧化物（ LPO ），继而分解成一系列复杂产物，其中包括丙二醛(MDA) 。脂质过氧化作用及其产物能够对细胞产生损害。而超氧化物歧化酶（SOD）是清除自由基的酶。研究表明9 ，氧自由基损害内皮细胞后，会导致内皮细胞功能受损，表现为血管舒张因子（一氧化氮）分泌的减少。也有证据表明超氧阴离子使NO 失活有关，既氧化作用加强导致NO 损伤，氧自由基是 NO 损伤的诱导剂，超氧阴离子及氧化型LDL 使内源性舒张因子NO 失活，而使内皮细胞受损 10 。以上两者相互作用，使NO 含量减少，收缩因子-舒张因子的平衡被打破，血管

14、在收缩因子的作用下发生收缩，使外周阻力升高，诱发高血压9 。辅酶 Q10 作为一种抗氧化剂，能够对内皮细胞进行保护，其降低血压的机制可能就与此有关。本实验目的即是想就此进行探讨。参考文献 ：1Ernster L.Facts and ideas about the function of coenzyme Q10 in mitochondria. In:Filkers K,Yamamura Y,eds.Biomedical and Clinical Aspects of Dcoenzyme Q.V oll Elseviet/North-Holland. Amsterdam,1997,1282Ya

15、magami T. Iwamoto Y. Folkers K. Blomqvist CG. Reduction by coenzyme Q10 of hypertension induced by deoxycorticosterone and saline in rats. International Journal for Vitamin & Nutrition Research. 44(4):487-96, 1974.3Folkers K. Drzewoski J. Richardson PC. Ellis J. Shizukuishi S. Baker L. Bioenergetics

16、 in clinical medicine. XVI. Reduction of hypertension in patients by therapy with coenzyme Q10. Research Communications in Chemical Pathology & Pharmacology. 31(1):129-40, 1981 Jan.4Danysz A. Oledzka K. Bukowska-Kiliszek M. Influence of coenzyme Q-10 on the hypotensive effects of enalapril and nitre

17、ndipine in spontaneously hypertensive rats. Polish Journal of Pharmacology. 46(5):457-61, 1994 Sep-Oct.5Rosenfeldt F. Hilton D. Pepe S. Krum H. Systematic review of effect of coenzyme Q10 in physical exercise, hypertension and heart failure. Review 29 refs Biofactors. 18(1-4):91-100, 2003.6 杨寿新 . 贝那普利联用辅酶Q10对原发性高血压疗效观察.中华使用医学杂志 .2003,3(4).314-3157Beyer RE.Free Radic Biol Med