磁珠分选原理及应用

1、磁珠分选原理及应用 2 MD0347.01 MACS技术原理 MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)： =免疫学+细胞生物学+磁力学 基于抗体对抗原的特异性识别 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的 3 MD0651.01 MACS 磁性分选 MACS微珠进行 磁性标记 未标记的细胞 先行流出 洗脱阳性分 选的细胞 4 MD0197.02 分选前标本制备：过滤 MACS预选滤器： 30m 5 MD0197.02 MACS 技术 设备与试剂 MACS微珠 MACS分选柱 MACS 分选器 详细分选方案*

2、6 MACSMACS技术技术 设备与试剂设备与试剂 MACSMACS微珠：微珠： MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。 特性：特性： 5050nmnm大小大小 对细胞没有毒性对细胞没有毒性 可生物降解可生物降解 不影响细胞特性不影响细胞特性 7 MD0057.03 MACS技术分选的CD8+ T 细胞 微珠 8 MACSMACS微珠微珠 直标微珠 多选微珠 间标微珠 9 MACSMACS技术技术 设备与试剂设备与试剂 MACSMACS分选柱：分选柱： 填充有不同规格的

3、铁珠。填充有不同规格的铁珠。 铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。 无菌包装。无菌包装。 可用于分选多种细胞及亚细胞物质、可用于分选多种细胞及亚细胞物质、 细菌、病毒、细菌、病毒、mRNA和蛋白质。和蛋白质。 专利产品专利产品 将磁场扩大将磁场扩大100010001000010000倍倍高高 纯度，高回收率纯度，高回收率 10 MD0061.02 在MS柱中产生的强大磁场 11 MACS分选柱： MACSMACS技术技术 设备与试剂设备与试剂 12 MACSMACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床分选器：从手动到自动，从实验室到临床 MACSMACS技术技术 设

4、备与试剂设备与试剂 13 MACS分选器 MACSMACS技术技术 设备与试剂设备与试剂 14 autoMACS分选仪 9种程序，一机完成所有细胞分选 成本低，两个可重复使用的分选柱 （2周内100次） 快速（310分钟） 重复性好 全自动分选，仪器操作简单 适用范围广：从少量标本（105） 到大量标本（4X109），进样量 0.5ml-50ml 8种全血微珠，可以做常见细胞的 全血分选，省去了费时的提取单个 核细胞过程 15 MACS技术主要优势 小磁珠: 50 nm（快速、不活化细胞、不沉淀） 保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化 铁和多聚糖组成，可生物降解） 与流式细胞仪兼容（不

5、影响细胞光学特性、不影响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间） 快速、简便、无菌 适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 选各种细胞、亚细胞物质） MD0043.02 16 MACS 细胞分选策略 阳性分选 去除分选 去除分选后再阳性分选 多重分选 MD0044.02 17 MACS细胞分选策略 1、阳性分选： 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记 后，作为阳性的标记组分直接分选出来。 优点： 高纯度，尤其是富集稀有的细胞 高回收率 操作简便、迅速 MD0044.02 18 MD016102 阳性分选策略 MACS 微珠磁 性标记 未标记细胞

6、先行流出 将分选柱移 出磁场，洗 脱阳性分选 细胞 19 MACS细胞分选策略 2、去除分选： 去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去 除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。 去除分选策略适用范围： 去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 不需要抗体和目的细胞结合 需进一步通过阳性选择分选细胞亚群 MD0044.02 20 MD0160.02 去除分选 磁性标记 分选未磁性标记细胞 21 MACS细胞分选策略 3、去除分选后再阳性分选： 即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。 适用范围： 非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。 要分选非常稀有细胞，先去除非目

7、的细胞再行阳性分选， 可获得高纯度的目的细胞。 MD0044.02 22 1. 去除非CD4+ T 细胞。 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标 记非CD4+ T 细胞 磁性分选去除标记细胞 先行流出为 CD4+ T 细胞 2. CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞 阳性分选靶细胞 CD4+ CD25+ 调节性T滞留在分选柱上，离开磁场后 洗脱下来 去除后再阳性分选CD4+CD25+双阳性细胞 23 MD0652.01 多选微珠标记 MACS 分选 磁性颗粒的酶解离 终止解离反应 根据第二标志 进行磁珠标记 MACS 分选 MACS细胞分选策略 4、多选微珠： 24 MACS畅销机器

8、与分选柱 MiniMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1盒MS分 选柱、1支价值7500元试剂（15088元）：可做阳性分选、小量标本、间标去除 分选、分子生物学分选 Mini&MidiMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、 1个 MidiMACS分选器、1盒MS分选柱、 1盒LS/LD分选柱、1支价值7500元试剂（ 27838元）：可做阳性分选和去除分选 MS分选柱：1盒25个，2763元 LS分选柱：1盒25个，4356元 LD分选柱：1盒25个，5100元 uMACS与u或者M分选柱：分子生物学分选 Vari

9、oMACS分选仪 autoMACS自动分选仪、CliniMACS分选仪 MD0044.02 25 MACS几种畅销磁珠与抗体 专利产品：CD133、CD303、CD304 特殊产品：人类DC系列：BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、 BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304) 小鼠DC系列：mPDCA微珠与抗体 干细胞产品： CD133、CD271微珠与抗体 细胞因子分泌细胞：CSA分选与分析 TH2细胞： CD294(CRTH)微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞：上皮肿瘤：CK、HEA 非血液肿瘤：CD45去除 死亡细胞去除试剂盒 分选转染细胞 分选HIV病毒、mRN

10、A、cDNA top ten：CD133、CD34、人CD4+CD25+、小鼠CD4+CD25+ CD303/CD304、人类NK、小鼠CD11c、anti-PE 微珠 小鼠干细胞试剂盒（系别阴性CD117）、CD4/CD8 MD0044.02 26 主要竞争对手分析 Dynal：大磁珠 主要市场：CD4、CD8等高频细胞， 优势：价格 劣势：回收率低（不能做低频细胞、弱表达细胞分选） 磁珠必需剪切（耗时细胞状态不佳） 大磁珠（活化细胞） 我们的优势：纯度高、回收率高、细胞活性好 不活化细胞，不改变细胞功能 省时、省细胞 产品品种最多，有专利产品 有手动、自动、临床级产品 有强大的技术支持队伍

11、 很好的声誉，市场占有率最高 MD0044.02 27 主要卖点 干细胞产品：人类：CD133、CD34、MSC试剂盒（CD271） 小鼠：系别阴性试剂盒、CD117微珠 定向分化培养基 DC产品： 人类：BDCA-1、BDCA-2/4 小鼠：CD11c NK产品： 人类：NK细胞阴选试剂盒、CD3/CD56 T细胞产品： CD4+CD25+调节性T细胞（人和小鼠） CSA系列 CD4、CD8微珠及阴选试剂盒 B细胞产品： CD19微珠及阴选试剂盒 肿瘤细胞分选：癌细胞富集试剂盒、HEA微珠、CD45阴选 单核细胞分选：CD14微珠及阴选试剂盒 间标微珠 死细胞去除试剂盒 预选滤器、FCR阻断

12、剂、T细胞活化与扩增试剂盒 流式细胞仪抗体（价廉、包装量大、优质） MD0044.02 28 识别DC和DC亚群 New (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) DC 亚群特异性标志: Blood Dendritic Cell Antigens 29 PE FITC APC MACS 技术分选与分析小鼠DC细胞 New 30 MACS 技术分选与分析大鼠DC细胞 New MD0044.02 Anti-DC(OX62) 微珠 用于从大鼠外周血、淋巴和非淋巴组织中分选或者去 除OX62+DC。 单克隆抗体OX62识别表达于大部分大鼠DC上的整合 素E2亚单位（分子量

13、150kDa）。 两个主要的树突状细胞亚群：CD4/OX41双阳性和 CD4/OX41双阴性亚群。 该抗原也表达于表皮TCR/+或/+的T细胞亚群和垂 体前叶星状滤泡样（S100+）细胞的一个亚群，但在朗 格罕氏细胞和巨噬细胞上不表达。 31 MACS 技术分选与分析功能性T细胞 MD0044.02 No Image T h 细 胞 （ C D 4 ） T c 细 胞 （ C D 8 ） 调 节 性 T 细 胞 (C D 4 + C D 2 5 + ) T C R r/d 细 胞 (T C R r/d 微 珠 ) N K /T 细 胞 (C D 5 6 多 选 微 珠 C D 3 微 珠 )

14、T 细 胞 亚 群 N a iv e T 细 胞 (C D 4 5 R O 阴 选 ) 活 化 T 细 胞 （ C D 6 9 、 C D 2 5 、 C D 3 0 ） 效 应 T 细 胞 （ C D 2 7 ） 记 忆 T 细 胞 （ C D 4 5 R A 阴 选 、 C D 4 5 R O 阳 选 ） T h 2 细 胞 (a n ti-C R T H 2 ) T 细 胞 功 能 亚 群 IF N -r IL -2 IL -4 IL -1 0 T N F -a 抗 原 特 异 性 T 细 胞 T 细 胞 分 选 32 MD0420.02 MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选 New 抗

15、原特异性 再刺激 细胞因子 分泌阶段 捕获试剂 标记 荧光标记和 磁性分选 Catch Reagent Detection Antibody Anti-PE MicroBeads cytokine secreting cell secreted cytokine 33 MD0420.02 MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选 New 分选前 刺激组 分选后 未刺激组 *百分比均为占CD4细胞百分比 34 MD0420.02 MACS 细胞因子分泌细胞分析New 刺激组 未刺激组 使用PE- CMVpp65/HLA/A2- tetramers 和IFN-g Secretion Assay - D

16、etection Kit (APC) or IL-2 Secretion Assay - Detection Kit (APC)检测 HLA/A2 CMV+ 患者PBMC。 *百分比均为占CD8细胞百分比 35 人类细胞因子分泌细胞人类细胞因子分泌细胞 分选与检测试剂盒分选与检测试剂盒 IFN-g g 分泌细胞分泌细胞 IL-2分泌细胞分泌细胞 IL-4分泌细胞分泌细胞 IL-10分泌细胞分泌细胞 TNF- 分泌细胞分泌细胞 MACSMACS 细胞因子分泌细胞分析与分选细胞因子分泌细胞分析与分选 New New 小鼠细胞因子分泌细胞分 选与检测试剂盒 IFN-g 分泌细胞 IL-2分泌细胞 I

17、L-4分泌细胞 IL-5分泌细胞 IL-10分泌细胞 36 人类干细胞分选微珠与试剂盒 CD34微珠及多选微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞 CD133微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞（MAPC） CD117微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、骨髓间充质细胞 CD45/GlyA去除分选试剂盒：用于从骨髓中阴选分选 多能成体干细胞（MAPC） CD105微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞 抗成纤维细胞微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞 多能成体干细胞（MAPC） MSC分选工具（CD271）new：用于从骨

18、髓中分选间充质细胞 MD0044.02 37 MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR)MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR)newnew 成分成分: 分选: CD271 (LNGFR)-APC Anti-APC MicroBeads FcR Blocking 培养: NH Expansion Medium (2x500 mL) CytoMix - CD271 (LNGFR) 质量控制: NH AdipoDiff Medium (12x8 mL) NH OsteoDiff Medium (12x5 mL) Introducto

19、ry offer 38 Ads in Blood (April & Mai) MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR) 人类MSC的标准化研究 CD271又叫做低亲和力神经生长因子 受体(LNGFR), 是迄今为止发现的最佳 MSC分选标志，可用于直接从人类骨髓 中分选MSC。 分选后CD271 (LNGFR)+ MSCs是一 群均一的MSC细胞群，而CD271阴性 细胞成分中没有成纤维细胞克隆形成单 位 (CFU-F)活性。 与贴壁培养的MSC相比，CD271分选 的MSC增殖能力增强101000倍。 CD271分选和扩增的MSC保留了多系 分化潜能，具有分

20、化为脂肪细胞和成骨 细胞、软骨细胞、内皮细胞的可塑性。 cumulative population doubling (CPD) 39 Ads in Blood (April & Mai) MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR) 人类MSC的标准化研究 Nadia Quirici等，Experimental Hematology 30 (2002) 783791 40 MACS小鼠干细胞分选试剂盒 ： Lineage Cell Depletion Kit:去除成 熟和分化的造血细胞，预富集造血干 祖细胞。 CD117 MicroBeads：分选早期和 晚期干

21、祖细胞。 Anti-Sca-1 MicroBeads：分选造 血干细胞和早期造血祖细胞。 CD117+Sca-1+lin细胞也有非造 血分化潜能，如分化为肌细胞、内皮 细胞、肝细胞、神经系统细胞。 CD45/Ter119微珠去除分选骨髓细 胞，可以得到MAPCs,也有体外分化 为多种细胞的潜能。 小鼠骨髓造血干细胞 (HSC) 定义 为 Sca-1+、 CD117+(c-kit)、 Thy-1low 和lin-细胞. 41 MACS 技术分选人类肿瘤细胞 New MD0044.02 上皮肿瘤细胞 根据表面抗原进行分选与分析： Anti-HEA (EpCAM) MicroBeads Anti-ErbB-2 (HER-2/neu) MicroBeads 根据细胞内细胞角蛋白分选与分析：cytokeratin 黑色素瘤细胞分选： Anti-melanoma MicroBeads 其它非造血系统肿瘤细胞: CD45 MicroBeads去除白细胞 骨髓瘤细胞： CD138 MicroBeads 霍奇金氏淋巴瘤/RS细胞： CD30 MicroBeads 42