(2021年整理)丙二醛含量测定

1、丙二醛含量测定丙二醛含量测定 编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（丙二醛含量测定）的内容能够给您的工作和学习带来便利。同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快 业绩进步，以下为丙二醛含量测定的全部内容。实验六、植物组织丙二醛含量测定 植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等.这些指标在一

2、定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明，植物在逆境胁迫或衰老过程中，细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累。活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。活性氧包括含氧自由基.自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基（o2)、羟自由基(oh)、过氧自由基(roo）、烷氧自由基(ro)、过氧化氢（h2o2）、单线态氧（o21)等.植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统,超氧化物歧化酶（sod)、过氧化氢酶（cat）、过氧化物酶pod和抗坏血酸过氧化物酶（asapod)等是酶促防御系统的重要保

3、护酶,抗坏血酸(asa）和还原型谷胱甘肽(gsh)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。丙二醛（mda)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤.因此,丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度,也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。所以在植物衰老生理和抗性生理研究中,丙二醛含量是一个常用指标。 原理 植物组织中的丙二醛(mda) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸（tba) 产生显色反应,反应产物为粉红色的3,5，5一三甲基恶唑2，4一二酮(trimet-nine）。该物质在539nm波长下有吸收峰。由于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应，并在该波长处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与

4、其它物质反应的影响，在丙二醛含量测定时，同时测定600nm下的吸光度，利用539nm与600nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量。材料、仪器、药品 1材料：植物抗逆性鉴定实验中的四种菠菜样品，即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照。 2仪器：（1） 分光光度计;（2） 离心机;（3）水浴锅：(4） 天平；(5） 研钵；（6） 剪刀;（7） 5ml刻度离心管；(9) 刻度试管(10ml)；(10） 镊子；（11） 移液管（5ml、2ml、1ml）；（12）冰箱。3药品：（1） 0.05mol/l ph7.8磷酸钠缓冲液；（2) 石英砂;（3) 5三氯乙酸溶液：称取5g三氯乙酸,先用少量蒸馏水溶解，

5、然后定容到100ml；(4) 0.5硫代巴比妥酸溶液：称取0。5g硫代巴比妥酸，用5%三氯乙酸溶解，定容至100ml，即为0。5硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液。 方法 1丙二醛的提取：取0.5g样品，加入2ml预冷的0。05mol/l ph7。8的磷酸缓冲液,加入少量石英砂，在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆，转移到5ml刻度离心试管，将研钵用缓冲液洗净，清洗也移入离心管中,最后用缓冲液定容至5ml。在4500转/min离心10min。上清液即为丙二醛提取液。2丙二醛含量测定:吸取2 ml的提取液于刻度试管中，加入0.5硫代巴比妥酸的5三氯乙酸溶液3ml，于沸水浴上加热10min，迅速冷却。于450

6、0转/min离心10min。取上清液于532、600nm波长下，以蒸馏水为空白调透光率100,测定吸光度。 3结果计算：(a532-a600) v1v丙二醛含量(nmol/g）=1.5510-1wv2 式中：a为吸光度;v1为反应液总量（5m1）;v为提取液总量（5ml)；v2为反应液中的提取液数量（2ml）；w为植物样品重量(0.5g）；1.55101为丙二醛的微摩尔吸光系数（在1升溶液中含有1mol丙二醛时的吸光度).4注意事项：（1) 0。10。5的三氯乙酸对mda-tba反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；(2） mdatba显色反应的加热时间,最好控制沸水浴1015

7、min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； （3) 如用mda作为植物衰老指标，首先应检验被测试材料提取液是否能与tba反应形成532nm处的吸收峰。否则只测定532、600nm两处a值,计算结果与实际情况不符，测得的高a值是一个假象；(4) 在有糖类物质干扰条件下（如深度衰老时），吸光度的增大，不再是由于脂质过氧化产物mda含量的升高，而是水溶性碳水化合物的增加，由此改变了提取液成分，不能再用532nm、600nm两处a值计算mda含量,可测定510、532、560nm处的a值，用a532一（a510-a560)/2的值来代表丙二醛与tba反应液的吸光值.实验结果记录实验前思考题（1）通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？（2）什么时候植物会发生严重的膜脂过氧化作用？简述其过氧化作用过程.(3）说明膜脂过氧化作用的对植物的效应。（4）tba为什么要溶解在三氯乙酸中？（5）提取液与tba的混合液为什么要加热？为什么加热时间又不能过长？(6）为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？（7）在计算公式中，为什么吸光系数的单位是微摩尔,而最后的含量单位却是毫微摩