免疫SOP：乙肝e抗体作业指导书

1、33文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411乙乙肝e抗体1. 分析原理采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：35l标本与加入的HBe抗原液混匀。标本中的抗- HBe与HBe抗原结合 第2步：加入生物素化的和钌标记的抗HBe抗体以及链霉亲和素包被的微粒，HBe抗原上仍然游离的位点被占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发

2、光，通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从抗HBe定标液得出的Cutoff值相比较。2. 标本要求标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、EDTA-K3、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝。标本在28度可稳定5天，-20度可稳定3个月。标本可冻融6次。有沉淀的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素

3、/mg粒子。含防腐剂。R1：HBeAg（灰盖），1瓶，12ml：HBeAg（E.coli，rDNA）浓度高于7ng/ml，HEPES缓冲液0.036mol/l，pH7.4，含防腐剂。R2：生物素化的抗HBeAg抗体;Ru(bpy)32+标记的抗HBeAg抗体（黑盖），1瓶，12ml：生物素化的抗HBeAg单克隆抗体浓度高于0.8mg/l；Ru(bpy)32+标记的抗HBeAg单克隆抗体浓度高于0.2mg/l；HEPES缓冲液0.036mol/l，pH7.4，含防腐剂。校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.0ml/瓶人血清, 含防腐剂Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.0ml/

4、瓶, 抗HBe（人）浓度高于3PEIU*/ml,人血清, 含防腐剂。（注：* PaulEhrlich 研究所单位）质控品：Elecsys 抗HBe质控品1和2 （PreciControl 抗HBe）货号1876384其他所需材料： Elecsys通用稀释液货号1732277 Elecsys2010分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号1662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号1662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号1930346 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号12985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊

5、断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HBe Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时； 根据规定进行多次标定。定标液范围：(电化学发光信号计数) 阴性（Cal 1） 300，000-1，500，000阳性（Cal 2） 1000-60005. 操作方法按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参

6、数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20 度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将抗HBeCal 1和Cal 2放在分析仪的标本测试区。只在标定时打开瓶盖。条形码自动提供定标所需的数据资料。定标完成后，将Cal 1和Cal 2放回28 度保存。6. 质量控制用Elecsys抗HBe质控品1和2（PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正

7、措施。7. 计算方法仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式（标本信号/ Cutoff）报告。8. 参考范围在随机选择的1000名健康供血者当中，有14例（1.4%）抗HBe有反应性；用该项试验检测251例慢性或曾经感染过HBV的患者中，210例呈现有反应性（83.7%）。9. 分析性能10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素5mg/dl）、溶血（血红蛋白2g/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2400U/ml）

8、。19种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。Elecsys 抗HBe测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 结果解释标本的Cutoff指数1.0判断为抗HBe无反应性，可判定该标本抗HBe阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数=1.0判断为抗HBe有反应性，可判定该标本抗HBe有反应性。12. 临床意义乙肝e抗体（anti-HBe）是乙肝病毒在肝细胞中增殖时出现的前-C/C基因的产物。经蛋白酶水解后，HBe蛋白质以非颗粒形式（16kD-20kD）分泌入血清中。在急性HBV感染时，血清中可出现HBeAg，但维持可测水平的时间很短暂（数天-数周）。测出HBeAg一般提示有大量病毒存在。在急性乙肝的恢复期，HBeAg转阴，取而代之的是相应的抗体（抗HBe）。急性和迁延性乙肝