徒手切片制作方法

1、精品文档一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简 单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和 活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是 徒手制片对于体积过小， 质地太软或太硬的材料， 则难于处理， 同时， 也不能制成连续切片，这些均为不足之处。二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片） 、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒 杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。 1%番红水溶液（或 50%酒精 溶液），0.5%固绿 95%酒精溶液， 70%、 85%、95%酒精，纯酒精、二 甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。三、方法与步骤1、

2、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、 叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成 宽约56毫米，长11.5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马 铃薯块茎等 ）中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两 半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成 筒状再切。2、切片 (1)盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住 材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外23毫米, 材料的切面必须保持水平方向。( 2) 右手执刀 (剃头刀或刀片 )，平放在左手食指之上，刀口向内， 自左前方向右后方滑行切割， 要用臂力

3、，不要用腕力， 不可向内平切。(3) 拉切的速度宜快， 一次切下， 不要中途停顿或似拉锯式， 以免损伤 材料或切得不平。(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立 即削平。(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿 润、润滑。(6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察 ;等切到相当数量 后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保 存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以 下几个步骤做成永久玻片标本。3、固定挑选出符合要求的切片， 用毛笔移入盛有 70%酒精的染色皿中进行固 定。固定时间为 16 分钟或更长

4、时间。4、染色、脱水、透明(1)用吸水管吸去 70%酒精，染以 1%番红( 50%酒精溶液)约 30 分钟。(2)再用吸管吸去番红，换用70沁85沁95%酒精进行冲洗、脱水， 每级酒精35分钟。(3)复染色。吸去酒精，用0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为 0.5分钟。(4)冲洗、脱水。用 95%酒精冲洗 1次，时间 10秒。后移入纯酒精 中脱水 2 3 次，每次 3 5 分钟。( 5)透明。吸去纯酒精，放入 1/2 二甲苯 1/2 纯酒精溶液中脱水和 透明 1次，时间 5分钟。(6)吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明 2次，时间 5分钟。5、封片、贴标签 将已透明材料用镊子或解剖针

5、轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树 胶，盖上盖玻片进行干燥。在已封好的切片左边贴上标签， 注明材料名称、 制作日期和制作者姓 名等项，以便查考。较好的切片， 其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色， 细胞质和纤维 素的壁则常被染成绿色， 红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下 选材-切片-固定（70%酉精尸1%番红（50%酉精溶液）染色-70%酉精 冲洗-脱水（85%酒精、95%酒精）-0.5%固绿（95%酒精溶液：）复染色 -冲洗（95%酒精1次）-进一步脱水（纯酒精23次）-透明（1/2纯酒精 十 1/2 二甲苯及纯二甲苯各二次 ） -封片（中性树胶 ）-

6、贴标签。附：药品的简单配方（1）1%番红：于蒸馏水或 50%酉精 100毫升中溶入番红粉末 l 克， 过滤后使用。（2）0.5%固绿：95%酉精 1 00毫升中加入固绿粉末 0.5克。徒手切片方法的改进 徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久 , 在石蜡切 片之前 , 基本上使用徒手切片。它的优点在于可以观察新鲜材料组织 和细胞的天然色彩 , 看到活体细胞结构状态 , 所以徒手切片运用在植 物学实验教学中比较普遍。为了克服传统徒手切片技术中的不足 , 我 们进行了改进 , 改为皮套加刀片。这种切片方法切片速度快 , 软硬质 材料都可以切 , 不需要任何夹物 , 既经济适用 , 又简单

7、易行。1 材料用品双面刀片 1 个,直径 11.5 cm 的乳胶管 , 毛笔、培养皿、载玻片、 盖玻片、吸水纸, 质量分数 1%的中性红染液或红墨水 ,新鲜的植物根、 茎、叶、花药和子房等。2 切法将直径11.5 cm的乳胶管剪成3.5 cm长的一段,用剪子从中间剖 开扣在右手的大拇指上 , 注意皮套一定要高于拇指 , 把要切的植物材 料, 紧贴在皮套的外侧 。如果是叶可以把它卷紧 , 所切的材料不可过 长, 大约 22.5 cm 即可。此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住 , 幼嫩的材料捏时不可用力过猛 , 以免损坏组织细胞。右手的拇指和食 指捏住双面刀片的一侧 , 手腕端平 , 把刀片的前

8、端与要切的材料保持 垂直相接状态 , 先切平材料 , 然后用腕力向内连续切片 , 刀片只要搭 住材料就可以垂直切片。另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、 垂直、从右 向左推切 , 如此连续切下去 , 然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入 培养皿的水中 ,避免干燥。3 染色、封片把载玻片和盖玻片用纱布擦拭干净 , 放在实验台上 , 加上 1 滴中性红 染液或红墨水 , 用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上 , 用解剖针轻轻拨入染色液中 , 大约 30 s 后, 吸去染色液 , 加 1 滴清水 封片。为了防止气泡的产生 , 用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧 , 使盖玻片的基部与滴液先接触 , 右手握解剖针挑着盖玻片从左向右 徐徐放下盖玻片 , 使气体从一侧排出 , 如果有多余的水溢出 , 可用吸 水纸吸干 ,再进行下一步的镜下观察。4 镜检镜下观察时 , 对好光源 ,