《免疫分析法进展》PPT课件

1、免疫分析法进展,制作：庄目德,自六十年代竞争分析原理提出，定量免疫获得巨大的进展,一、抗体与免疫分析,免疫分析实际上是一种特殊的试剂分析，起点是抗体成为分析试剂。 1.抗体的结构与功能 抗体泛指与待测分子特异性结合的蛋白质分子，包括免疫球蛋白（immunoglobulin）, 受体（receptor）和其他结合蛋白质，主要是免疫球蛋白，常用的是IgG分子,IgG分子由四条以二硫键相连的多肽链构成，有三个功能区。抗体在Fab区结合抗原分子，同时通过hi区的转动以适应不同距离的抗原决定簇。与抗原结合后，IgG分子构象改变，暴露出Fc上的活性位点，从而表现出固定和激活补体以及粘结单核细胞等亲细胞反应

2、的功能,2抗体作为分析试剂的评价,抗体的特异性是无与伦比的不需或只需要简单的预处理。有较高的稳定性。这两点奠定了分析免疫高度灵敏和高度专一的基础。此外，抗体还有一个独特的性质：每个抗体分子有两个抗原的结合点，即多价性。然而抗体缺乏高灵敏试剂应具备的分析信号反差。 3传统免疫分析与标记免疫分析,传统的免疫分析借助抗体的多价性和激活补体反应特性，可设计免疫沉淀分析（沉淀法与凝集法）和脂质体溶解分析法。 而标记分析法则屏弃抗体自身具备的分析性能，依靠在分析体系中引入探针系统进行检测。提高了灵敏度与检测范围，但带来了检测相与过量的标记试剂的分离问题。所以它又分为匀相免疫分析与非均相免疫分析。现在一个成

3、绩卓著的发展方向是传统与标记的结合,4标记分析的原理：三方式与四环节,a非竞争方式（标记抗体）；b。标记抗体的竞争方式；c。标记抗原的竞争方式。非均相可用任意方式。均相目前用的是标记抗原的分析方式,四环节为：抗体生产、标记试剂制备、分析方式设计、分析信号检测。免疫分析按不同的标记物分为放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、荧光免疫分析（FIA）、发光免疫分析（LIA）等,标记物的生产,二、现代免疫分析概述,1抗体。多克隆抗体是第一代应用的抗体。目前广泛应用的是第二代单克隆抗体，性能更优越，而且来源连续稳定。近年来，第三代抗体基因工程抗体，使人们能在基因水平上设计与改造抗体。 2标记物与

4、标记方法。如下表。常用的是：放射性同位素、酶及其底物、荧光分子、化学和生物发光系统。自80年代，放射性同位素标记比例下降，酶标记占主导地位，生物素-亲合素的多重标记法已广泛应用,3信号检测。与相应的标记物对应。主要为吸光光度法、荧光（包括时间分辨荧光）光度法、发光检测法,三、免疫分析的特点与趋势,1、基因工程抗体 （1） 从被免疫的动物血清中获得的是多克窿抗体，缺点是抗体不均匀，来源间断。单克窿克服上述缺点,2） 抗独特型抗体。其特点是结合位置是独特型抗体的抗原结合点，反应性质类似抗原。可代替抗原，且来源丰富，易标记，水溶性好。 （3） 双特异性抗体。具有两个不同的抗原结合点。一个Fab端结合

5、代测的抗原，另一端可结合标记物。 2应用生物素-亲合素体系的多重标记 小分子探针不存在空阻效应，可增加抗体或抗原的标记率，提高灵敏度。来源广泛易于提取，生物分子易于活化。这标记体系,这标记体系采用分别标记方法（生物素抗体,探针亲合素）。 3 时间分辨荧光免疫分析 用一束超短脉冲的光激发样品，样品中荧光分子受激发射，但背景荧光短寿命，很快衰减为零，只剩下长寿命的铕螯合物标记的荧光。这就克服了背景荧光的影响。 目前，较好的时间分辨荧光免疫分析方法有,4 多元免疫分析和环境组分免疫分 析 由于抗体的特异性，在进行多元分析时得同时使用多种抗体。有两种设计方法。 第一是多探针标记法。较成功的有双镁标记法和双荧光探针标记分析法。要求是有相容的分析条件和显著的信号差别。 第二是多组分定位包被空间分辨分析法。固相非均匀免疫分析，只一种探针，不同的待测物被分别定位于各自的分析点，经过普通的免疫分析程序，通过扫描测定完成理论,上任意多组分的同时分析。缺点是要在固相上检测，且定位包被与检测技术有一定的难度。双探针标记多元环境组分免疫分析同时使用两种探针，浓度测定不依赖样品体积,5 自动和实用免疫分析法 包括自动化免疫分析仪、免疫分析传感器、大众化免疫分析,acs180全自动化学发光免疫分析系统免疫分析