液相提高灵敏度的方法

1、液相增加柱效、提高灵敏度的小诀窍,资料收集：,生化 多肽- 5988-6316EN 升温对于反相 HPLC分离强疏水肽的影响 (B27) Polypeptide,流动相: A: 含0.05%三氟乙酸的水 B: 含0.05%三氟乙酸的乙腈 2% B / min 进样量: 100L (50g的6M脲/5%乙酸) UV: 210 nm 流速: 1 mL/min 室温,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5m,室温 300C 400C 500C 600C 700C,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度,环保,样品: 除草剂 流动相: 52/48

2、 0.1 M乙酸钠/甲醇, pH 6 流速: 0.45 mL/min 温度: 40, 90 检测: UV,除草剂: 柱温的影响 Herbicides: Effect of Column Temperature,1. 西玛津 2. 敌草隆 3. 扑灭津 4. 扑灭净 5. 异丙甲草胺,1. Simazine 2. Diuron 3. Propazine 4. Prometryn 5. etolachlor,液相色谱柱: Zorbax StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5m,40,90,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度,生物制药,液相色谱柱: Zorbax 3

3、00 StableBond-C3 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5m,肽类/蛋白质: 升温对分离的影响 Peptides/Proteins: Effect of Elevated Temperature,样品: 多肽 流动相: A = 5: 95, 乙腈 : 水, 0.10%三氟乙酸 (V/V%) B = 95: 5, 乙腈 : 水, 0.085%三氟乙酸 (V/V%) 梯度: 在 20 min内 15-53%, 后运行时间 12 min 流速: l.0 mL/min 温度: 室温 -60 检测: UV 215 nm,1. 亮氨酸脑啡呔 2. 血管紧张素II 3. 核糖核酸酶A 4

4、. 牛胰岛素 5. 细胞色素C 6. 溶菌酶 7. 肌红蛋白 8. 碳酸酐酶,1.Leucine Enkephalin 2. Angiotensin II 3. Rnase A 4. Insulin(BOV) 5. Cytochrome C 6. Lysozyme 7. Myoglobin 8. Carbonic anhydrase,提高柱温， 可增加柱效 （提高灵敏度,生物制药,液相色谱柱: Zorbax StableBond-C8 色谱柱尺寸: 150 mm, 5m,减小毛细管内径来提高 低浓度样品的检测灵敏度 Reducing Capillary ID to Improve Sensit

5、ivity for Concentration-Limited Samples,流动相: 60%乙腈/40%水 流速: 内径 0.3 mm-4 uL/min 内径 0.5 mm-10 uL/min 内径 1.0 mm-50 uL/min 内径 4.6 mm-1.0 uL/min 温度: 室温 检测器: UV 254 nm 样品: 200 ng联二苯 (100 nl,减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度,色谱柱技术 5988-6454EN 使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 15 mm 3.5m,

6、流动相: 乙腈: 1%甲酸=32: 68 UV: 254 nm 流速: 1.0 mL / min. 30C 进样量: 5 L,响应时间: 4.0秒 响应时间: 2.0秒 响应时间: 1.0秒 响应时间: 0.5秒 响应时间: 0.1秒,1.尿嘧啶 2.乙酰水杨酸 3.N-乙酰苯胺,1.Uracil 2.Acetylsalicylic acid 3.Acetanilide,缩短检测器响应时间，可增加柱效 （提高灵敏度,色谱柱技术 ：不同硅胶类型比较 (TE1,流动相: 含0.05%甲醇的二氯甲烷,液相色谱柱,toluene benzanilide phenol benzyl alcohol,Zo

7、rbax Sil Spherisorb Zorbax Rx-Sil,甲苯 N-苯甲酰苯胺 苯酚 苯甲醇,使用高纯硅胶， 可增加柱效 （提高灵敏度,有机化学 5988-6366EN pH对苯胺取代物分析的影响 (ORCH1,流动相 25mM磷酸: 甲醇=58: 42 流速: 1 mL/min 22C,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,对位甲氧基苯胺 间位苯甲胺 3-氨基-苯甲腈 对位氯苯胺 间位氯苯胺 邻位氯苯胺,pH: 2.5 pH: 7.0,改变流动相pH， 可增加柱效 （提高灵敏度,生化 肽 5988-6293EN 三氟

8、乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 (B10) Peptide,流动相: A: 水和三氟乙酸 B: 乙腈和三氟乙酸 0 - 30% B （30 min.内） 流速: 1 mL/min UV: 254 nm 进样量: 6uL 十肽菌素标样S1-S5（疏水性有略微差异） 40C,液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,1.0%三氟乙酸,0.05%三氟乙酸,0.25%三氟乙酸,改变流动相pH， 可增加柱效 （提高灵敏度,食品分析 5988-6360EN 流动相强度对单糖和二糖分离的影响 (FD4,流动相: 乙腈/水如图 流速: 1 mL/min 示差

9、折光检测器,液相色谱柱: ZORBAX NH2 色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5m,果糖 葡糖 蔗糖 Palatinose 海藻糖 异麦芽糖,乙腈/水 70/30 乙腈/水 75/25,改变有机相%， 可增加柱效 （提高灵敏度,色谱柱技术 5988-6468EN 有机改性剂和pH对于选择性的影响 (TE5,流动相: 25 mM磷酸缓冲液 流速: 1.0 mL/min. 22C,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-CN 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,anisidine m-toluidine 4-cl-aniline 3-aminobenzonitrile

10、 3-cl-aniline 2-cl-aniline,甲氧基苯胺 间位苯甲胺 4-氯-苯胺 3-氨基苯甲腈 3-氯-苯胺 2-氯-苯胺,42%甲醇 ：58%缓冲液 30%甲醇 ：70%缓冲液,pH 2.6,pH 3.0,改变有机相%， 可增加柱效 （提高灵敏度,色谱柱技术 5988-6453EN ZORBAX Eclipse系列色谱柱的选择性 (TE31,液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,流动相: 甲醇 : 水=70: 30 UV: 254 nm 流速: 1.0 mL / min. 室温,Zorbax Eclipse

11、 XDB-苯基 Zorbax Eclipse XDB-C8 Zorbax Eclipse XDB-C18,1.尿嘧啶 2.苯酚 3.4-氯-硝基苯 4.甲苯 5.萘,1.Uracil 2.Phenol 3.4-Cl-nitrobenzene 4.Toluene 5.Naphthalene,改变键合相， 可增加柱效 （提高灵敏度,生物制药,液相色谱柱: Zorbax Extend-C18 色谱柱尺寸: 2.1 x 150 mm, 5um,三氟乙酸和氢氧化铵用于肽类 RP-HPLCESI-MS分离的选择性比较 Selectivity Comparison of TFA and NH4OH for

12、Peptide RP-HPLCESI-MS Analysis,流速: 0.25 mL/min. 温度: 25 梯度: 5-60% B in 20 min. LC/MS: 正离子, ESI- Vf 70V, Vcap 4.5 kV, N2- 35 psi, 12 L/min., 300 样品: 4L (各50 ng,三氟乙酸条件: A- 0.1%三氟乙酸水溶液 B-0.085%三氟乙酸 80%的乙腈溶液,NH4OH条件: A- 20 mM NH4OH水溶液 B- 20 mM NH4OH 80%的乙腈溶液,改变有机添加剂， 可增加柱效 （提高灵敏度,生化 肽 十肽菌素 5988-6299EN 酸对

13、于反相肽的分离的影响(B16) decapeptide,液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m,十肽菌素 S1 十肽菌素 S2 十肽菌素 S3 十肽菌素 S4 十肽菌素 S5,decapeptide S1 decapeptide S2 decapeptide S3 decapeptide S4 decapeptide S5,0.1% 三氟乙酸,0.025 M H3PO4,改变有机添加剂 可增加柱效 （提高灵敏度,流动相: A: 含相应的酸的水相 B: 含相应的酸的乙腈 0%-30% B（30 min.内） 进样量: 6L肽标样 UV: 254 nm 流速: 1 mL/min 40C,色谱柱技术 流动相对色谱的影响(TE40,液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 50 mm 3.5m,UV: 254 nm 流速: 1 mL/ min. 室温,Uracil Butylparaben Naphthalene Dipropylphthalate Acenaphthene,尿嘧啶 尼帕尔金丁酯 萘 二丙基邻苯二甲酸酯 苊,刻度混合: Dial-