常用HPV检测方法的分析.ppt

1、常用HPV检测方法的分析,HPV检测的意义,HPV 感染与CIN 和宫颈癌变有着密切的关系 HPV的检测可能对宫颈癌的预后有预测作用 HPV检测对科学研究的价值,常用检测方法,1细胞学检查； 2. 组织学检查； 3感染组织中HPV蛋白的检测； 4. HPV感染的血清学检查； 5. HPV基因组检测,细胞学检查,传统巴氏涂片（CV） 液基薄层细胞学技术(TCT) 自动细胞学检测系统test，又称LCT 计算机辅助细胞检测系统（CCT,优点与问题,优点： 操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查； 缺点： 凹空细胞是HPV 感染的主要形态学改变， 但由于其他病毒感染及人为因素均有可能造成细胞内出现空泡或

2、凹空样变，而且细胞学检查易受取材、染色及细胞病理医生的主观判断等因素的影响，因此应用细胞病理学检测HPV 存在灵敏度低、特异性差、假阴性率和假阳性率高、不能对HPV 进行分型,组织学检查,肉眼观察； 阴道镜观察； 组织检查,优点与问题,优点： 操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查； 缺点：准确率低，人员素质要求高，病人痛苦程度大,感染组织中HPV蛋白的检测,针对HPV抗原，主要是衣壳蛋白制备抗体，通过免疫学方法进行检测。ELISA，免疫沉淀法等,优点与问题,优点：原理明确，操作相对简单 缺点：由于HPV 至今尚不能在体外培养， 且其免疫原性较弱，故血清学方法检测灵敏度较低,HPV感染的血清学检查

3、,检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测,优点与问题,优点：原理明确，操作相对简单 缺点：血清学检测的对象是抗原和抗体，由于人体对HPV产生免疫应答有一定的迟滞性，所以血清学检测对无免疫应答者和HPV 潜伏期感染者会产生漏检,HPV基因组检测,PCR类检测方法 Southern杂交法 原位杂交 杂交捕获法,PCR类检测方法,优点：该方法灵敏度高， 缺点：是容易发生样品间的交叉污染，从而导致假阳性率高。另外利用该方法进行HPV分型操作比较烦琐,Southern杂交法,优点：该方法灵敏度及特异性均高，适 用于HPV 分型、HPV-DNA分子质量鉴定、基因组酶切图谱建立

4、及物理状态研究等。缺点：其操作麻烦、耗时、费用高，且必须应用新鲜组织标本，故不宜大规模临床使用,原位杂交,该法利用HPV 探针与组织中的HPV-DNA 杂交，首先将探针和组织中的双链HPV-DNA 变性为单链，然后使探针与组织杂交. 优点：利于病理学分析 缺点：杂交链的稳定性不高，在杂交过 程中，部分探针单链复性，使杂交率降低，影响HPV-DNA 的检出率,杂交捕获法,杂交捕获(hybridcapturesystem，HCS) 实验是美国Digene 公司新发展的一种检测HPV DNA 的技术，其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。 基本实验步骤如下： 1. 样本DNA 双链被

5、释放并分解为核苷酸单链; 2. DNA 单链与RNA 探针结合为RNADNA 杂交体; 3. 特异性抗体将RNADNA 杂交体固定在试管壁或微孔壁上; 4. 结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNADNA 杂交体结合,使信号放大; 5. 碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNADNA 杂交体的含量,杂交捕获一代（HC-)试验可检测9 种高危型HPV ,包括16 、18 、31 、33 、35 、45 、51 、52 和56 。所用的反应载体是试管； 杂交捕获二代试验(HC)原来的试管法改为96 孔平板法，能同时检测13 种高危型HPV (16 、18 、31 、

6、33 、35 、39 、 45 、51 、52 、56 、58 、59 和68),优点：其灵敏度和特异性均较好， 缺点：存在交叉污染、费用昂贵等问题利用该法进行HPV 分型需要将HPV 常见基因型逐个筛选才能最后确定感染的HPV 型别，成本高,HPV基因芯片检测方法,敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠。有研究报道，HPV 基因芯片的检测灵敏度是PCR方 法的100 倍。 操作简单：通过1次杂交检测不仅可以判断待检样品中是否存在HPV 感染，而且可以鉴定出是哪种型别的HPV 感染。 针对性强：对样品中的HPV-DNA 直接进行检测，可以检出HPV 的潜伏期感染，克服了血清学及免疫组化检测法对潜伏感染会产生漏检的缺点，从而实现对疾病的早期快速诊断。 同时检测多种HPV 型别，对多重HPV. 感染的判断一目了然，克服了其他HPV. 检测方法难以判断混合感染或操作烦琐的缺点,问题,成本高，芯片制作和使用需要较多昂贵的仪器，如用于原位合成寡核苷酸的光刻机器和合成仪，用于合成后点样的全自动点样仪，用于信号检测的激光共聚焦扫描仪或荧光显微镜等设备，这些都成为基因芯片检测成本居