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文档简介
1、实验七微生物的紫外诱变,一、目的要求,掌握紫外线诱发微生物突变的基本原理。 掌握选育高产突变型菌株的方法。,二、基本原理,紫外线是一种最常用的物理诱变因素。它的主要作用是使DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而引起突变。 紫外线照射引起的DNA损伤，可由光复活酶的作用进行修复，使胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。 为了避免光复活，用紫外线照射处理时以及处理后的操作应在红光下进行，并将照射处理后的微生物放在暗处培养。,三、实验器材,菌株 枯草芽孢杆菌 培养基 淀粉培养基 溶液或试剂 碘液，无菌生理盐水，盛4.5ml无菌水试管 仪器或其他用具
2、1ml无菌吸管，玻璃涂布棒，血细胞计数板，显微镜，紫外灯（15W），磁力搅拌器，台式离心机，振荡混合器等。,四、操作步骤,制备菌悬液 取枯草芽孢杆菌48h斜面培养物4-5支用10ml无菌生理盐水洗下菌苔倒入无菌大试管振荡30s，打散菌块3000r/min离心10min弃上清液用无菌生理盐水洗涤菌体2-3次制成菌悬液用显微镜直接计数法调整细胞浓度108个/ml。（老师完成） 制作淀粉琼脂培养基平板,紫外线处理 打开紫外灯预热20min。 各取3ml菌悬液，分别加入2套6cm无菌平皿中，并放入一根无菌磁力棒。 将平皿置于磁力搅拌器上，打开皿盖，在距离30cm，15W的紫外灯下分别搅拌照射1min和
3、3min。盖上皿盖，关闭紫外灯。 稀释：把照射过的菌悬液用无菌水稀释成10-1-10-6； 涂平板：取 10-4、10-5、10-6稀释液和未经照射的稀释液（对照）各0.1ml涂平板，重复三个平板； 培养：用黑布或纸包好，37培养48h。,分别计算紫外线处理1min和3min后的存活率和致死率 存活率（%）= 致死率（%）=,观察诱变效应 选取cfu数在5-6个左右的处理后涂布的平板观察诱变效应。 分别向平板内加碘液数滴，在菌落周围出现透明圈。 分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC比值）。 选取HC比值大的菌落转接到试管斜面上培养，可用于复筛。,五、注意事项,紫外线照射计时从开盖起，加盖止； 先开磁力搅拌器，再开盖照射，使菌悬液中的细胞接受均等照射； 从紫外线照射处理开始，直到涂布完平板的所有操作步骤都需在红光下进行。,六、实验结果,观察诱变效应，计算存活率、致死率、HC比值。结果填入1.(1)(2)。,六、实验结果,七、思考题,.(2)、(3) 用紫外线进行诱变时，为什么要打开皿盖？为什么要在红光下操作，暗环境下培养？ 分析你的实验结果：
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