超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别

超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别收藏本文章作者：黄锁义， 万承俊， 邹永芳， 李容 【关键词】 超声波提取；,鱼腥草；,总黄酮；,鉴别摘要：目的为充分利用鱼腥草植物资源，探讨鱼腥草总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从鱼腥草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=6.48%，回收率为102.4%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取鱼腥草黄酮类物质的有效途径。关键词：超声波提取； 鱼腥草； 总黄酮； 鉴别The Extraction and Identification of Total Flavanone from Houttuynia Cordata Thunb. by Ultrasonic WaveAbstract：Objective In order to make use of the resources of Houttuynia cordata Thunb., the extraction identification of total flavanone of Houttuynia cordata Thunb.was approached.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Houttuynia cordata Thunb. with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of Houttuynia cordata Thunb. .ResultsThe content of the total flavanone of houttuynia cordata Thunb. was C=6.48% and the rate of recovery was 102.4%.ConclusionThe outcome and the purity of the flavanone are all very high .This method is a purely physical process, and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Houttuynia cordata Thunb.Key words：Ultrasonic wave Extraction; Houttuynia cordata Thunb.; Total flavanone; Identification 鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)，又名蕺菜。别名丑菜，侧耳根，猪鼻孔，臭根草。列于名医别录下品，是味较常见的中草药，广泛分布于长江以南各省，是一种很好的天然保健食品原料1，2。其味辛，性微寒，归肺经，其功能有清热解毒，消痈排脓，利尿通淋，用于肺痈吐脓，痰热喘咳2。现代药理研究表明36：鱼腥草有抗病毒、抗菌、解热、抗炎镇痛、升白细胞等作用。近年来鱼腥草有了新的用途,如:用来治疗喘息型肺炎、病毒性心肌炎、小儿呼吸感染等7，8。鱼腥草的主要化学成分有癸酰乙醛（也叫鱼腥草素）、月桂醛、2十烷酮、甲基正壬基酮、癸醛、亚油酸及大量的黄酮类化合物29。有文献报道鱼腥草中总黄酮的提取方法有乙醇提取法2。但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究都已有报道10，11，表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响11。但超声技术应用于提取鱼腥草中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取鱼腥草总黄酮及鉴别。1 仪器与试剂1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)。1.2 试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品制品检定所）；广西百色市东风菜市市售新鲜鱼腥草。2 方法与结果2.1 总黄酮成分提取取市售新鲜鱼腥草，烘干，粉碎。精密称取鱼腥草粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇至仅剩57 ml为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定鱼腥草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。2.3 定量实验总黄酮的含量测定2.3.1 波长的选择取样品液适量，在0.3 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.1 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510 nm处测吸光度。结果见表1。表1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度（略）根据上表得回归方程：A=2.141104 14.377C，r=0.999 9。2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备操作测定吸光度,A=0.910，根据回归方程：A=2.141104 14.377C，计算样品中总黄酮的含量C=6.48%。2.3.4 回收实验精密量取样品液2 ml，加入标准芦丁对照品2 ml（0.1 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为102.4% 。2.4 定性实验总黄酮的鉴别2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。2.4.2 纸层析 取样品溶液10 l点在滤纸上。用正丁醇:醋酸水=415为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。3 讨论实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为102.4%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等12。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用1318。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。本文实验结果表明，鱼腥草中含有较为丰富的黄酮。因此，鱼腥草具有广泛开发和利用价值。参考文献：1 张丰强.临床大本草M.北京：华夏出版社，2002：877.2 游见明，刘达玉. 鱼腥草黄酮提取工艺研究J.食品研究与开发,2004，25（6）：55.3 李 文，王少军. 鱼腥草提取液抗流感、腮腺炎病毒效果观察J.预防医学文献信息，1999，5(4)：377.4 侯晓梅，曾庆源，沈英才. 鱼腥草治疗带状疱疹的疗效观察J.社区医学杂志， 2005，3(5):83.5 陈卫兵，姜彩娥，熊南燕，等. 鱼腥草对青霉素和头孢唑林抗菌的影响J.医学导报，2003，22（2）：80.6 任玉翠，周彦刚. 鱼腥草液升白细胞作用的研究J.预防医学文献信息，1999，5(1):5.7 黄慧珍，严金莲. 鱼腥草雾化吸入治疗喘息型肺炎的护理观察J.时珍国医国药，2003，14，（7）：438.8 王冬玲. 鱼腥草注射液治疗小儿呼吸道感染疗效观察J.时珍国医国药，2005，14（5）：837.9 马均清，王淑玲.常用中草药现代研究与临床应用M.天津：天津科技翻译出版公司，1995：143.10 刘祥义. 超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究J.云南化工，2003，30（1）：27.11 谢明杰，宋 明，邹翠霞，等. 超声波提取大豆异黄酮J.大豆科学，2004，23(1):75.12 夏杏洲，张 辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究J.食品研究与开发，2002，23(5):35.13 华光军，郭 勇.黄酮类化合物药理研究进展J.广东药学，1999，9（4）：9.14 黄河胜，马传庚，陈志武.黄酮类化合物药理作用研究进展J.中国中药杂志，2000