第十四章真菌检验技术.ppt

微生物学检验 第十四章真菌检验技术 返回总目录 本章内容 学习目标及重点 学习目标 掌握真菌的检验方法熟悉真菌标本采集及注意事项 真菌的鉴定程序 真菌药物敏感试验方法了解常用抗真菌药物本章重点 临床真菌标本的采集和处理 真菌的形态学检查 培养技术和鉴定试验 真菌药物敏感试验 第一节真菌形态检验技术 一 标本的采集和处理1 标本的采集 根据真菌感染部位采集不同的标本 取毛发 皮屑 指 趾 甲等标本 取痰液 脓汁 血液 脑脊液等标本 2 标本采集注意事项 第一节真菌形态检验技术 临床标本 分离培养 直接检查 免疫学检查 观察菌落 生化反应 染色镜检 直接镜检 3 检验程序 核酸检测 其他鉴定试验 形态学检查 病理组织标本 动物实验 镜检 PAS HE 第一节真菌形态检验技术 二 直接镜检 标本处理液 1 KOH溶液适于检查致密的难以透明的材料 2 生理盐水用于观察真菌的出芽现象 3 水合氯醛 石炭酸 乳酸封固液透明力较强 只限于不透明的标本 镜检 注意真菌与其他混杂物的鉴别 第一节真菌形态检验技术 三 染色镜检革兰染色 各种真菌均为革兰阳性 图1 乳酸酚棉蓝染色 染成蓝色 图2 墨汁染色 背景染成黑色 菌体不着色 图3 荧光染色 荧光显微镜下发出荧光糖原染色 多糖成分呈红色 核为蓝色 背景为淡绿色 返回章内容 图1 图3 图2 第一节真菌形态检验技术 第二节真菌培养技术 一 基本条件1 常用工具平皿 试管 接种针 接种环 接种钩 培养箱等 一 基本条件2 培养基真菌营养要求不高 最适pH4 0 6 0常用的培养基 第二节真菌培养技术 显色鉴定培养基 真菌特异性酶的底物 无色 产色基团游离 显色 真菌的酶分解代谢基质 原理 第二节真菌培养技术 第二节真菌培养技术 二 培养方法 仅用于培养生长繁殖较快的真菌 观察真菌结构及生长发育过程 多用于菌种传代接种与保存 第二节真菌培养技术 三 生长现象 类酵母型菌落 丝状菌落 观察菌落 生长速度 菌落大小 表面形态 性质 颜色 边缘 底部等 酵母型菌落 返回章内容 第二节真菌培养技术 一 常用生化试验 第三节真菌的鉴定方法 二 免疫学检查 第三节真菌的鉴定方法 三 其它鉴定诊断方法l 厚膜孢子形成试验 接种 玉米粉吐温 80琼脂 25 孵育1 3天 待测菌 每天于显微镜下观察 应用 白假丝酵母菌的鉴定 方法 结果 白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假菌丝 假菌丝顶端见1 2个厚膜孢子 第三节真菌的鉴定方法 2 芽管形成试验 方法 待测菌 0 5 1ml血清 37 水浴2 3小时 镜检 应用 白假丝酵母菌的鉴定 三 其它鉴定诊断方法 结果 绝大部分白假丝酵母菌可形成典型的放大镜柄状芽管 芽管 第三节真菌的鉴定方法 三 其它鉴定诊断方法 3 动物接种 4 病理组织检查 5 核酸检测 6 真菌毒素的检测 用于分离病原性真菌 确定真菌的致病性 研究抗真菌药物 用于深部真菌感染的诊断 用于真菌的分型鉴定 有ELISA 生物学方法 薄层层析法 高效液相色谱法等多种方法 7 G试验 用于念珠菌 曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断 返回章内容 第三节真菌的鉴定方法 第四节真菌药物敏感试验 一 临床常用抗真菌药物 第四节真菌药物敏感试验 二 酵母菌药敏试验方法 微量稀释法1 试验前准备 RPMI1640培养基 含L 谷氨酰胺 酚红 不含碳酸氢钠 培养基 第四节真菌药物敏感试验 2 方法 第四节真菌药物敏感试验 3 结果判断 4 质量控制采用标准菌株作为每次测定质控菌株 其MIC应落在预期值范围内 第四节真菌药物敏感试验 二 酵母菌药敏试验方法 纸片扩散法1 试验前准备 商品化含药物纸片 药物纸片 用无菌生理盐水调整至0 5麦氏单位 待检菌液制备 含葡萄糖和亚甲蓝的M H琼脂 第四节真菌药物敏感试验 二 酵母菌药敏试验方法 纸片扩散法2 方法 用无菌棉签蘸取菌液 35 孵育18 24小时若生长不良可延长至48小时 贴上药物纸片 均