母乳抗肿瘤ppt课件

母乳中的HAMLET对肿瘤和细菌的抑制 六安人乳库2012年3月 HAMLET 人 乳白蛋白分子部分展开后与油酸结合形成的复合物 HAMLET在体外能诱导各类癌细胞凋亡 包括肺癌 咽喉癌 肾癌 结肠癌 膀胱癌 前列腺癌和卵巢癌 以及黑色素瘤 脑胶质母细胞瘤和白血病 但是对正常细胞没有任何毒性 形成HAMLET需要以下条件 在母乳喂养儿童的胃内 在低pH值环境中打开蛋白质分子释放出钙 以及对酸敏感的脂肪酶水解母乳中的甘油三酸酯释放出油酸 摘自 HAMLETKillsTumorCellsbyApoptosisStructure CellularMechanisms andTherapy TheJournalofNutrition2005 135 1299 1303瑞典兰德大学 挪威Haukeland大学医院 HAMLET的制备方法 提纯 人乳乳清液用硫酸铵沉淀 析出乳白蛋白 然后进行苯基 琼脂糖和体积排阻层析 层析柱为琼脂糖G 50 蛋白液的纯度通过SDS PAGE 琼脂糖凝胶电泳和光谱技术进行分析脱钙 将25mg提纯得到的 乳白蛋白溶于1 8mMTris HCl溶液中 加入3 5mM的EDTA以移除Ca离子 蛋白分子构象的变化通过近紫外光普和ANS 8 苯胺基 1 萘磺酸铵盐 荧光光谱检测离子交换层析 将10mg亚油酸溶于0 5ml99 5 的乙醇中 超声波处理3分钟 之后加入10ml10mMTris HCl 注入用DEAE TrisacrylM 一种层析柱填料 法国BioSepra公司 装填的层析柱 14cm 1 6cm 连接到生物逻辑层析系统 BioRad公司 中 用NaCl进行梯度洗脱 洗脱液A 10mMTris HCl pH8 5 洗脱液B 含有1MNaCl的洗脱液A 蛋白洗脱液透析脱盐 至少更换4次蒸馏水 最后将透析液冻干 得到 乳白蛋白 摘自 Conversionofa lactalbumintoaproteininducingapoptosis PNAS2000 97 8 4221 4226瑞典兰德大学 人乳对肺部癌细胞的抑制 体外 摘自 Apoptosisinducedbyahumanmilkprotein Proc Natl Acad Sci 1995 92 8064 8068瑞典兰德大学 卡罗林斯卡学院 MAL 用离子交换柱处理过的多聚体 乳白蛋白 可见 人乳及结合了钙离子的多聚体 乳白蛋白具有明显的抑制癌细胞生长的功能 MDCK 一种肾癌细胞株 暴露于人乳中产生的凋亡 人乳1 10稀释 24小时 A对照样B实验样 人乳对肺部癌细胞的抑制 体外 HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 皮肤乳头状瘤是作为研究人体环境 0 9 NaCl 中HAMLET功效的第一个模型 摘自 HAMLETKillsTumorCellsbyApoptosis Structure CellularMechanisms andTherapy JournalofNutrition 2005 135 1299 1303瑞典兰德大学 挪威Haukeland大学医院 HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 摘自 Treatmentofskinpapillomaswithtopicalalpha lactalbumin oleicacid TheNewEnglandjournalofmedicine2004 350 26 2663 2672瑞典兰德大学 图中第1列 A D G 为3位患者治疗前的病灶 图中第2列 B E H 为3位患者接受HAMLET治疗后3周时的病灶 图中第3列 C F I 为3位患者接受HAMLET治疗后2年随访时的病灶 患者1的病灶基本上完全消失 患者2和3则减少了75 HAMLE对膀胱癌的抑制 a图 采集9个病人在滴注HAMLET前的尿液和滴注后两小时的尿液 苏木紫和伊红检测肿瘤细胞数 发现进行HAMLET滴注后的病人尿液中肿瘤细胞数均显著高于滴注前 b图 分别滴注 乳白蛋白 PBS NaCl 同样的方法对比滴注前后的尿液 滴注前后无明显差异 摘自 Bladdercancersrespondtointravesicalinstillationof HAMLEThuman lactalbuminmadelethaltotumorcells InternationalJournalofCancer2007 121 1352 1359瑞典兰德大学 HAMLE对膀胱癌的抑制 c图 台盼蓝染色经HAMLET滴注后的病人尿液 镜检能发现存在有大量的死亡或凋亡细胞 HAMLE对膀胱癌的抑制 a图 第一排是P2 P5 P9这三个人的滴注前的尿液离心后涂片 第二排是这三个人的滴注后的尿液离心后图片 都用苏木紫 伊红和TUNEL染色 TUNEL是能特异性的对凋亡细胞进行染色的试剂 在荧光显微镜下显示出荧光 从图片可以看出 滴注前病人的尿液里总细胞数量少 能被TUNEL染色的细胞更少 而滴注了HAMLET后的病人 尿液中会存在有大量的凋亡细胞 HAMLET对膀胱癌的抑制 内镜摄影图 左边的四幅彩图是分别来自四个病人的HAMLET滴注前的肿瘤 右边的四幅彩图是HAMLET滴注后的肿瘤 黑白图是肿瘤形状的示意图 金属圈直径均为5mm 可以看见滴注后肿瘤尺寸变小 HAMLE对膀胱癌的抑制 a图 手术后对病人切除的肿瘤组织进行TUNEL染色 黑白图片为明场下的照片 荧光图为TUNEL染色后的照片 可见经过HAMLET滴注 肿瘤组织内有大量的细胞虽然没有脱落下来 但是正在被诱导凋亡 b图上面四幅照片是对手术中切除的正常组织的组织切片进行TUNNEL染色的图 下面四幅照片为明场下的组织切片图 可见正常的组织虽然也经过了HAMLET滴注 但是几乎没有细胞凋亡现象 就证明了HAMLET复合体能特异性地诱导膀胱癌细胞的凋亡 而对正常组织没有毒性 HAMLET对胶质母瘤细胞的抑制 对实验大鼠进行TUNEL分析后显示 大鼠脑内肿瘤出现大面积凋亡 但周边组织未显示出TUNEK染色 此外 HAMLET没有侵害正常的脑组织 也没有产生任何的神经症状 HAMLET具有选择性地诱发恶性肿瘤凋亡的能力 HAMLET对肿瘤细胞的抑制 摘自 Structureandfunctionofhuman lactalbuminmadelethaltotumorcells HAMLET typecomplexes FEBSJournal2010 277 4614 4625瑞典兰德大学 爱尔兰圣三一学院 瑞典Umea大学 新加坡A STAR HAMLET侵入肿瘤细胞的过程 最初结合到膜细胞上 随后转运进细胞中 细胞的完整性维持到180分钟 最终充满了HAMLET 母乳抑制白血病细胞和肺炎链球菌 STRPN 肺炎链球菌Jurkat 一种白血病的细胞 HAMLET对白血病细胞和肺炎链球菌的杀灭作用远远强于 乳白蛋白 HAMLET或 乳白蛋白的浓度 g ml 摘自 Apoptosis LikeDeathinBacteriaInducedbyHAMLET aHumanMilkLipid ProteinComplex PLoSONE2011 6