氨茶碱 33700.doc

XXXXXXXXXXXX医院检验医学中心地址:XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXUniCel DxI800 免疫发光系统仪器检定标准操作规程版本号: x.x文件号: xx-xx-xx-xx生效日期:xxxx年xx月xx日页 码:第x页,共xx页氨茶碱分析步骤 货号：33700用ACCESS免疫分析系统定量检测人血清氨茶碱浓度内容表原理2标本采集2试剂和必须品3定标5质控6检测步骤6结果6检测说明7检测注意事项7参考文献8Beckman Instruments, Inc. Chaska, MN 55318原理检测原理Access 氨茶碱的检测是一种竞争结合的酶免疫检测。样品和大鼠抗氨茶碱单抗、氨茶碱-碱性磷酸酶酶结合物和包被了羊抗大鼠捕捉抗体的磁性颗粒一起加入到反应管中，样品中的氨茶碱辛与氨茶碱-碱性磷酸酶酶结合物竞争结合有限的特异性氨茶碱抗体的结合位点，最后抗原-抗体复合物通过捕捉抗体结合到磁性颗粒表面。而后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去处未和固相结合的其它成分。最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530）, 已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品氨茶碱的对应关系而计算出样品中的氨茶碱浓度，反应产生的光子与样品中氨茶碱的含量成反比。概述氨茶碱（1，3-二甲黄嘌呤）是一种自然出现的生物碱，与咖啡因和可可碱的分子结构相似。它本来的药物治疗目的是治疗哮喘，主要的药效是使支气管的平滑肌放松。其它的药效还包括直接刺激心肌、利尿和刺激中枢神经系统（1）。氨茶碱还可被用于早产的低体重新生儿排除或降低窒息和心动过缓(2,3,4,6)。因为氨茶碱的治疗范围非常狭窄，并且在成人和儿童个体内的排泄速率也有很大不同，因此检测血清中氨茶碱浓度非常重要。各种给药方法均可出现毒性效果，血清中氨茶碱的浓度超过20g/ ml (111 mol/l) 时即可出现毒性症状。最佳的治疗效果并且显示最低的毒性效果时的血清氨茶碱浓度为1020 g/ml (56111 mol/l)，但是即便是在该狭窄的范围，一些病人中依旧会出现毒性症状。出现的症状包括恶心、呕吐、头痛、易怒、失眠、肌肉强直、癫痫、心悸、心动过速、高血压、循环衰竭和室性心率失常。值得注意的是，严重的症状可以在没有许多表现较轻的症状之前发生。可通过减少用药量来改善毒性症状。氨茶碱的正常半衰期在各人群中很不相同：大于6岁的儿童大概为3.7 1.1小时；不吸烟的成人为8.7 2.2 小时；吸烟的成人为45小时。减少氨茶碱的清除和延长氨茶碱的半衰期的因素有：1) 肾脏和肝功能异常；2) 年龄大于55岁，特别是伴有慢性肺脏疾病的男性；3) 心力衰竭； 4) 新生儿 (半衰期可延长至24小时)； 5) 与某种药物分类在一起（大环内酯类抗生素和西米替丁）(5)。在1949年，Schack 和 Waxler 阐述了一种利用紫外分光光度法对血和组织中的氨茶碱进行检测（7）。近年来又发展了许多更先进的方法，如气相色谱、高压液相（HPLC）、放射免疫（RIA）和酶免疫分析（EIA）（8，9）。Access 氨茶碱检测是一种酶免疫分析，综合了许多如HPLC、RIA、EIA等方法的优点：准确、灵敏、可自动化。标本采集A.血清是推荐的样品类型，在下一次用药前采集标本检测“谷值”的氨茶碱治疗浓度，在静脉给药后1小时、口服后12小时或延时给药后38小时采集标本以检测“峰值” 的氨茶碱治疗浓度（6）。 B.遵循国家临床实验室标准委员会推荐的以下标本处理、运行和储存步骤(19，10)：1. 用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。2. 离心前使标本完全自然形成凝块。3. 全程保证样品管的密闭状态。4. 离心获得血清后的两小时内，至少将500 ml血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。5. 储存样品，保持样品管完全密闭，在室温(15 到 30C)条件下不超过8小时。6. 如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2 到 8C冰箱冷藏。7. 如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20C冰箱冻藏。8. 标本只能复融一次。C.样品中至多含有10mg/dl (171 mol/l) 的胆红素和脂血标本中含有相当于1800 mg/dl (20.32 mmol/l)的甘油三脂和溶血标本含有最多1000mg/dl(10g/l)的血红蛋白外不影响氨茶碱检测的结果。试剂和必需品 Beckman Instruments, Inc.1000 Lake Hazeltine DriveChaska, MN 55318A.R1:Access 氨茶碱试剂盒：2盒装货号：33700： 100 测试，50个检测/盒现成可用，在2到 10C冰箱中顶端朝上存放，可一直保存到标签中注明的失效期。试剂盒必须在2到 10C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存。试剂盒被吸取使用后，在2 到10C条件下可稳定28天，一旦发现有蒸发、结晶或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效。所有抗血清均为多抗，除非有专门说明。1. R1a: 含包被有羊抗大鼠IgG 的磁性颗粒的Tris缓冲液，含离子表面活性剂，小牛血清白蛋白(BSA)， 0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin* 300。2. R1b: 含标记有碱性磷酸酶的氨茶碱酶结合物的Tris缓冲液，含离子表面活性剂，小牛血清白蛋白(BSA)， 0.1% 的叠氮钠和0.25% ProClin 300。 3. R1c: 含大鼠抗氨茶碱单抗的Tris缓冲液，含离子表面活性剂，小牛血清白蛋白(BSA)， 0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin 300。B.Access 氨茶碱定标品货号：33705： 4.0 ml/瓶定量检测的定标是用已知分析浓度的标本进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。定标曲线储存于仪器中，可将样本检测中得到的光量子值转化成特定的分析浓度。现成可用，使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，在210环境可稳定到定标品瓶标签上标出的失效期。质控结果落到允许的范围之外是定标品失效的信号。定标操作步骤请参见Access免疫分析系统的操作指南和参考手册。1. S0：人血清含 0.1% 的叠氮钠和0.5% ProClin 300 ，含有0.0 g/ml (mol/l) 的氨茶碱。2. S1, S2, S3, S4, S5：人血清基质中含分别氨茶碱浓度大概为5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 及 40.0 U/ml (大概 28, 56, 83, 111, 及 222 mol/l)， 0.1% 的叠氮钠和0.5% ProClin 300 ，准确浓度详见瓶上标签。3. 定标卡：1C.Access 底物货号为 81906: 4 瓶x 130 ml/瓶。现成可用，下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。前提储存稳定性未开瓶2 到8C可一直保存到标签注明的失效期使用前的平衡(未开瓶)15 到30C (室温条件)至少18 小时最长 14天使用中(已开瓶)内部底物支持位置最长 5天使用中 (已开瓶)外部液体架的底物位置最长14天R2 底物：Lumi-Phos 530 (缓冲液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性剂量)。按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。D. Access 冲洗缓冲液货号：81907 4 x 1950 ml/箱现成可用。在室温条件下(15 到 30C)可稳定到包装上注明的失效期。底物本底检测值的增高或在“双抗”体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。R3 冲洗缓冲液：Tris 盐缓冲液，离子表面活性剂， 6.0 40 g /ml (222 mol/l)，或用Access氨茶碱 S0点定标品与样品1：1稀释后检测，检测后的结果乘以2即可得到这些病人的实际数值。参见操作指南关于运行预稀释样品的内容说明。如果样品浓度低于检测线性的低值，报告结果为 0.5 g /ml (3mol/l)。B.与所有诊断测试一样，地高辛结果应与病人所有其它的临床表现一起来分析，包括临床病史其它检测报告和其它合适的信息。Access is a trademark of Beckman Instruments, Inc.*Lumi-Phos 530 and Lumigen are trademarks of Lumigen, Inc.*ProClin 300 is a trademark of Rohm and Haas Company, or of its subsidiaries or affiliates.参考文献Beckman Instruments, Inc. Access Theophylline product insert, Chaska, MN 55318, 170154.Beckman Instruments, Inc. Access Substrate product insert, Chaska, MN 55318, 170279.Beckman Instruments, Inc. Access Wash Buffer product insert, Chaska, MN 55318, 170278.1.Ritchie, J.M. 1975. Central nervous system stimulants. In The Pharmacological Basis of Therapeutics: 367-378. Edited by Goodman, L. and Gilman, A. New York: MacMillan Publishing Co. 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