（邱志超） 大学生创新项目结题报告

项目类别项目批准号B. 理科附件3 华南农业大学大学生科技创新活动项目结题书项目名称： 甲硝唑抗体制备研究 申 请 人： 邱 志 超 杨 瑾 所在院部： 食 品 学 院 专业年级：03食品科学与工程（食品质量与安全）联系电话：13360032693 指导教师： 雷红涛 职称 讲师 立项日期： 二五 年 四 月 一 日 结题日期： 二五 年 四 月 十二 日华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心 填 表 说 明 一、 填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。 二 、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报大学生科技创新活动项目指导中心。三 、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；四级标题四号仿宋，用“”标示。示例：一、XXXX课题立项与研究的目的意义（一）XXXX课题立项与研究的目的的意义1、XXXX课题立项与研究的目的意义XXXX课题立项与研究的目的意义四、如表格不够，可以加附页。一、 简表项目简况项目名称甲硝唑抗体制备研究项目类别B、理科类；申请经费1200元起止年月2005.4-2006.4项目组成员姓 名性别出生年月年级专业班级所在学院上学年综合测评分项目中的分工本人签字邱志超男1984.603质检一食品学院3.64抗原合成杨 瑾女1985.103质检一食品学院3.34抗体制备指导教师情况姓名雷红涛性别男学位硕士职称讲师研究方向食品安全免疫快速检测授课名称食品化学综合实验 高级食品分析技术 食品营养学项目简介硝基咪唑类药物是一类具有杀菌或抑菌活性的药物，但应用量过大或使用不当，都可残留于肉、蛋、奶、水产品等动物性食品，威胁人们身体健康，损害我国国际贸易利益，但国内尚未见其现场快速检测方法研究报道。本课题为以甲硝唑为对象，研究不同方法合成其人工抗原，进一步研制其抗体制备，为后期建立硝基咪唑类残留药物快速检测方法奠定基础。在国内首先成功合成出了甲硝唑半抗原半抗原，并利用核磁共振、质谱、红外、紫外等先进手段进行了鉴定，结果较好；利用合成的人工抗原，进行了免疫，获得了抗血清，目前阻断试验效果尚不明显。二、项目研究的内容与方法（一）研究内容1、人工原合成和鉴定：包括硝基咪唑类残留药物的衍生或修饰改造、与载体蛋白连接，偶联物纯化、鉴定方法研究等。2、抗体研制：用合成的人工抗原，选择合适的免疫方式免疫动物，研制兔抗硝基咪唑类药物多克隆抗体（二）研究方法1、人工抗原合成： 免疫原制备：甲硝唑和琥珀酸酐起反应生成半琥珀酸，再以混合酸酐的方法使之变成牛血清白蛋白（BSA）（DMZ-BSA）和卵清蛋白(OVA)(DMZ-OVA)。包被抗原制备：同免疫原，仅将BSA换成OVA。2、人工抗原鉴定：偶联产物以透析或凝胶过滤分离纯化，人工抗原鉴定采用紫外光谱法等判断偶联是否成功以及偶联率高低。3、抗体制备：常规法制备多克隆抗体。用甲硝唑人工免疫抗原分别免疫小鼠，采用间接ELISA法筛选，目前的抗体效果尚达不到要求，需要进一步实验。三、项目研究过程与资料查阅情况（一）项目研究过程2005年4月-2005年8月 甲硝唑半抗原制备、鉴定2005年8月-2005年10月 人工抗原制备、鉴定、动物免疫，ELISA检测2005年11月-2006年4月 抗体制备（部分实施）（二）资料查阅情况我们通过中国期刊网、导师和国内文献传递服务机构等方式获得所需文献资料。其中所得重要资料如下：1、谭紫电，何菱，郑时龙等.微波辐射制备甲硝唑琥珀酸单酯。中国医药工业杂志，1998:29(12):5625632、Terence L , Lisa C , Steven R et al. Production and characterisation of polyclonal antibodies to a range of nitroimidazoles. Analytica Chimica Acta 2003(483):1932003、Johansen M , Latsen C. Inter J Pharm , 1984(21):2012094、Johansen M , Latsen C. Inter J Pharm , 1987(35):39455、Cosar C, Crisan C. Horclois R et al. Arzneim-Forsch, 1996(16):23296、Joan V, Filip V, Dirk P et al. Bull. Soc. Chim. Belg. 1985(94):591596四、项目成果完成形式和价值目前正在申报专利甲硝唑人工抗原制备方法1项。制备出的硝基咪唑类残留药物人工抗原免疫原性较好，可用于制备抗体，用于建立免疫检测方法。这对于保障食品安全，提高食品残留物分析水平都具有非常重要的意义。制备的抗原为本项目的后续研究奠定了良好基础。五、经费使用情况本课题预期使用经费1500元，项目完成后并未超出。经费主要用于文献传递，购买原药，实验动物，对抗原的鉴定以及耗材上。具体使用情况如下：实验动物 200元常规试剂 400元分析检测 400元耗材 400元文献检索等 100元合计 1500元经费来源：学校科技创新基金 1500元六、申请人对该项目研究工作完成后的认识总结通过本次课题研究实践学习，一方面增广和强化了专业知识和实验操作技能，开豁了视野，另一方面也锻炼了自身的综合素质，如与人沟通与传递信息的能力，外出查文献的能力等。实验研究是一个漫长而又艰辛的过程。实验本身就是在不断的失败中探索前行。在实验过程中，我们遇到了不少挫折，也曾动摇过信心，但是在导师的鼓励下，我们仍看到希望；就是这样，每当实验中取得一些进展时，我们都会兴奋不已，也因此而更坚定了信念。在实验中，我们学会整理资料，安排实验进程。我们发现，研究不仅仅是做实验的数据，更重要的是记录、整理和分析数据，要时刻提醒自己“做什么”和“为什么”，在正确思路的引导下才可能会做出好的正确的实验结果。实验活动使得我们必须解决一些实际问题。我们尽力调节好生活、学习和实验研究的时间安排，必须做好“为实验牺牲私人时间”的思想准备。实验有时是枯燥乏味的，不断的重复某种实验操作或是对实验的漫长的等待，这使我们真正感受到自己平常的幸福在课室学习相对来说是多么的轻松愉快啊！因为客观原因，课题内容做了调整，经过多次失败和探索，我们在国内首次成功合成出甲硝唑半抗原和人工抗原，并且正在整理论文，虽然未能进一步进行下一步工作，但通过试验，我们学到了寻找问题、解决问题的基本方法，这是我们最大收获！七、指导教师对项目完成情况的意见该课题组同学前期查阅了很多资料，合理设计了实验方案，实验中独立思考，知难而上，在国内首先成功合成出了甲硝唑半抗原半抗原，并利用核磁共振、质谱、红外、紫外等先进手段进行了鉴定，结果很好；利用合成的人工抗原，进行了免疫，获得了抗血清，但阻断试验效果不明显。由于原材料问题，对研究内容进