基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和整合素（Integrinβ3）在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达及意义.doc

基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和整合素（Integrin3）在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达及意义【摘要】目的研究基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和整合素（Integrin3）在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达情况，并探讨其与妊娠期高血压疾病发病的关系及两者的相关性。方法SP法分别检测Integrin3、MMP9在10例妊娠期高血压疾病患者及10例正常妊娠者胎盘组织中的表达。结果妊娠期高血压疾病组胎盘Integrin3表达明显高于正常妊娠组(P0.01)，妊娠期高血压疾病组胎盘MMP-9表达明显低于正常妊娠组（P0.01）。结论本研究显示:与正常妊娠组比较妊娠期高血压疾病患者胎盘组织Integrin3表达明显增加、MMP9的表达明显减少,表明Integrin3、MMP9可能参与妊娠期高血压疾病的发生和发展。 【关键词】 妊娠期高血压疾病胎盘基质金属蛋白酶-9（MMP-9）整合素（Integrin3 ）妊娠期高血压疾病是危及母婴安全的发病率较高的疾病，病因及发病机制至今尚不明确1。有关研究表明在着床和胎盘发育过程中，基质金属蛋白酶（MMP-9）起着十分重要作用2。整合素β3能决定胚胎滋养层细胞的侵入能力3，且在整个胚胎早期发育阶段有表达并持续至妊娠期。 笔者采用SP法分别检测了Integrinβ3,MMP-9在妊娠期高血压疾病胎盘中的表达,并用正常妊娠胎盘做对照,分析Integrinβ3,MMP-9在妊娠期高血压疾病发病中的作用，并通过分析它们之间的相互关系进一步探讨妊娠期高血压疾病的发病机制。1 资料与方法1.1 资料来源 以2006年12月2007年2月在哈尔滨医大二院妇产科住院的妊娠期高血压疾病患者 10 例为研究对象，按照全国统编教材第6版妇产科学妊娠期高血压疾病的诊断和分类标准。病例均无其它产科并发症及原发性肝、肾疾病，年龄（271.1)岁,平均孕周(36.11.2)周。选择正常产妇10例为对照组,年龄(261.3）岁,孕周(371）周,两组间年龄及孕周均无显著差异。1.2 方法1.2.1 标本采集及处理 胎盘组织娩出后取母面中央小叶处2cm×2cm立即置入10%中性福尔马林液中固定24h,低温石蜡包埋,4μm连续切片。1.2.2 整合素β3、MMP-9的检测 进行免疫组织化学染色(SP法)检测,具体操作方法见说明书。第一抗体分别为兔抗人整合素-β3多克隆抗体 AB-193（chemicon生物试剂公司美国），兔抗人基质金属蛋白酶9 多克隆抗体 ZA-0336（北京中杉公司）。显微镜下观察整合素β3，MMP-9在上述组织标本中的表达情况。1.2.3 结果判定 用低倍和高倍镜观察切片,阳性细胞为镜下组织细胞结构清晰,胞浆内有棕黄色颗粒,染色明显高于背景。在高倍镜下每张切片随机选择5个视野,计数100个细胞/视野,阳性细胞数50%为强阳性(+)。1.3 统计学处理 所得数据采用SPSS 13.0软件包进行统计分析,根据资料性质采用 Kruskal-Wallis 秩和检验和Spearman秩相关，P0.05有统计学意义。2 结果2.1 整合素β3在正常妊娠和妊娠期高血压疾病患者胎盘母面中的表达及比较 10例正常妊娠胎盘母面中整合素β3表达(+)6例,(+)3例,(+)1例; 10 例妊娠期高血压疾病患者的胎盘母面中整合素β3表达(+) 2 例，(+)8例；两组比较,差异有显著性(P0.01)。即妊娠期高血压疾病患者胎盘中整合素β3的含量明显高于其在正常妊娠组的胎盘中。2.2 MMP-9在正常妊娠和妊娠期高血压疾病患者胎盘母面中的表达及比较 10例正常妊娠胎盘母面中，其中（-）0例，(+)2例，(+)3例，(+)5例;10例妊娠期高血压疾病患者的胎盘母面中，其中（-）为3例(+)5例,(+)2例，(+)0例。两组比较,差异有显著性(P0.01)。即妊娠期高血压疾病患者胎盘中,MMP-9的含量明显低于正常妊娠组胎盘中。见表1。表1 integrinβ3,MMP-9在妊娠期高血压、子痫前期及正常妊娠患者胎盘中表达情况（略）注：与正常妊娠组比较*P0.01，*P0.01。3 讨论 妊娠期高血压疾病的发病原因，经多年产科学的研究，得出几种病因学说，但至今尚未完全阐明，如子宫缺血学说等。子宫缺血学说的实质是胎盘或滋养叶细胞缺血1，胎盘缺血的关键可能在于滋养叶细胞缺血，滋养叶细胞缺血与早孕期子宫胎盘血管床发育受阻有关，其原因在于子宫螺旋形小动脉生理重铸过程障碍，表现为螺旋形小动脉重铸的数量明显减少，深度大部仅限于蜕膜段螺旋形小动脉。妊娠期高血压疾病滋养叶细胞浸润仅达蜕膜段，少数血管可以不发生此种生理变化，导致胎盘缺血。因而，在胚盘着床和胎盘发育早期即存在滋养层细胞缺血、缺氧。由于重铸过程是滋养细胞生理性浸润的结果，所以，重铸障碍的实质是滋养细胞浸润能力下降的结果。重铸过程中细胞穿过基底膜及侵入细胞外基质要求对其中的重要成分如各种胶原、基质糖蛋白以及蛋白多糖进行蛋白酶解4。滋养细胞能分泌一组蛋白水解酶，其中只有基质金属蛋白酶(MMP)能消化内膜细胞外基质5。滋养层细胞对其游走部分子宫内膜细胞外基质的降解是胚盘着床的关键步骤之一。MMP来自一族同源酶，其特点是活化点上都有一 zn2+原子它们以惰性的酶原形式分泌，通过部分水解松动其结构而得以激活。研究表明6，妊娠期高血压疾病患者绒毛合体滋养细胞的MMP一9阳性表达明显低于蛋白水解酶，其分泌减少将影响胎盘着床和血管重铸，从而导致胎盘供血、供氧不足。胎盘缺血、缺氧，使其局部出现氧化应激，引起脂质过氧化和绒毛间隙的白细胞活化致血管内皮损伤，最终引发妊娠期高血压疾病的发生。本试验的研究结果即MMP-9在妊娠期高血压疾病组表达明显低于对照组且随病情加重而降低明显有统计学意义，其表达受妊娠期高血压疾病病情影响，从而可进一步解释其临床症状的严重程度。 整合素是一类普遍存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,由α、β两个亚单位以非共价键形式连接成的异二聚体分子。整合素通过二价阳离子结合域可特异性识别配体的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽序列,从而介导细胞与细胞、细胞和细胞外基质(ECM)之间相互作用,发挥其粘附和信号转导两大基本功能, 整合素β3（Integrinβ3）它是血管生成中内皮细胞的一种特殊性整合素，Integrinβ3一个配体骨刺激素也在子宫内膜上皮表达,说明了在子宫内膜表面有多种介导胚泡和子宫内膜相互作用的方式。研究表明, Integrinβ3除影响子宫内膜容受性外,还能决定胚胎滋养层细胞的侵入能力。关于整合素在胚胎植入的作用机制,Lessey7提出整合素Integrinβ3能结合和激活基质金属蛋白酶和纤溶酶激活剂(plasminogen activator,PA),并对MMP和PA的分泌合成起靶定向作用。宫腔上皮细胞外部以及胚胎表面Integrinβ3表达表明,这种整合素在胚胎植入过程中能够诱导、激活和定位蛋白水解酶,最终导致基膜的降解,而且降解片段充当细胞迁移的信号,进一步刺激滋养层浸润。有关报道提示子宫内膜整合素β3在着床期表达的丧失导致母体对胚泡的识别、粘附功能不全,是影响子宫内膜容受性的因素。过量的ECM可引起MMPs和金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)平衡紊乱,阻碍胚泡正常植入导致着床失败。研究表明,受一些细胞因子和生长因子的调控,整合素β3在人类创伤愈合、肿瘤转移过程中的血管生成发挥了作用。Integrinβ3不但参与了胚胎发育过程中血管的生成,而且这种作用可被β3抗体所抑制。 细胞通过整合素的介导与细胞与细胞外基质发生粘附，进而分泌蛋白水解酶降解细胞外基质，这是细胞进行细胞外侵润转移的基本作用机制。在肿瘤细胞中已有很多研究表明细胞外基质蛋白与整合素相互作用影响基质蛋白酶的分泌，而在妊娠期高血压疾病的滋养层细胞中，这方面研究报道相对较少，本次研究结果说明Integrinβ3在妊娠期高血压疾病组表达相对与对照组明显增加且有统计学意义，但是，还不能针对这样结果就得出结论认为Integrinβ3 和MMP-9是负相关。笔者认为也许两者在妊娠期高血压疾病是负相关，也许在Integrinβ3 和MMP-9之间存在着另几种因子介导，笔者认为下一步在加大样本例数的同时还要增加两者之间相关因子进一步探讨两者在妊娠期高血压疾病中表达情况及相关。【参考文献】 1林其德妊娠高血压综合征病因学研究与展望J中华妇产科杂志，2003，38(8)：471-4722李黎,陈士岭,邢福祺.基质金属蛋白酶-9及其抑制物-3在人种植窗期子宫内膜的表达特点及作用J.中华妇产科杂志，2000，35(9):544-5463张翠莉,王应雄.整合素3在生殖领域中的作用J.生殖医学杂志，2004，3（12）：127-1294Xu P，Wang Y，et alEffect of matrix proteins on the expression of matrixmetaloproteinase-2，-9，ant tissue inhibitors of metalloproteinase in human cytotrophoblast cells during the first trimesterJBiol Reprod，2001，65(1)：240-2465Okamoto T，Niu R，Yamada S，et alReduced expression oftissueinhibitor of metalloproteinase TI MP22 in gestational tropoblastic diseasesJMol Hum Reprod，2002，8(4)：392-3986Wang H，Li Q，Shao L，et alExpression of matrix metallopro-teinase-2-9，-14，and tissue inhibitorsofmetalllopro-teinase-1，-2，-3 in the endometrium and placenta of rhesu