快速分析多巴胺和血清素.doc

快速分析多巴胺和血清素摘要：随着神经系统实验室检测多巴胺和血清素样品的增多，对检测的时间和灵敏度的要求也不断提高。本文采用了新型电化学检测器Coulochem进行分析，在6分钟内即可完成检测灵敏度可达4飞摩尔级别，如果降低色谱柱内径到3毫米灵敏度则升至2飞摩尔，方法快速准确，灵敏度高。 关键词：离子色谱ICS-5000，Coulochem，多巴胺，血清素，脑皮层 1前言 近几年，许多神经系统实验室对影响生物神经系统的生物胺的分析需求逐渐增加。随着检测样品频率的增加，对缩短检测时间的要求也在增加。并且，大脑的很多区域现在都在研究中，比如脑皮层，虽然较之前的大脑区域研究已经减少了影响生物神经系统的化学物质的输出量。因此，一个灵敏的检测方法被开发出来以帮助神经系统学家们在6分钟内快速测定多巴胺和血清素。 一些神经系统学家仅需要检测脑微量透析样品中的多巴胺，但其他人则希望可以有一个速度快，灵敏度高的方法同时测定两种物质。灵敏度经常会是个问题，因为有些脑区域（例如脑皮质）中含有的多巴胺水平很低，有时会要求色谱柱上的灵敏度达到一飞摩尔。 HR-80的标准分析色谱柱和下面写明的流动相可以测定500毫微微克（相当于4飞摩尔）的多巴胺。然而，通过把色谱柱的内径变为3.0毫米内径并增加流速到0.7ml/min，实验的色谱柱的灵敏度可以增加到250毫微微克（相当于2飞摩尔）（见图1） 由于多巴胺可在很低的电压下氧化，检测器的检测条件设置合适可以提供更好的灵敏度和选择性。此外，这种方法可以帮助使人工脑脊液产生的前期产物最小化。但是，如果同时需要检测血清素，电压必须提高到220毫伏左右。 2材料和方法ICS-5000，包括一个泵一个手动进样器和一个Coulochem 检测器。 离子色谱条件：色谱柱：HR80 x 3 mm I.D；流动相：按描述；流速:：0.70 mL/min；温度：室温；进样体积:：10 - 20 L；检测器和检测条件：检测器：型号5300，Coulochem；型号5014B，分析池；型号5020，保护池。检测池电位： E1 = -75 mV；E2 = +220 mV；EGC = +250 mV。流动相组成：150 mM（41.4 g/2L） 一水磷酸二氢钠，（EM Science）； 4.76 mM（2g/2L） 柠檬酸（JT Baker）； 3 mM（1.73 g/2L） 十二烷基硫酸钠（Acros Chemicals）； 50M * EDTA（Fisher Scientific）； 10（200 ml/2L） 甲醇（EM Science）；15（300 mL/2L） 乙腈（EM Science）；调节pH = 5.60 氢氧化钠（99.99），半导体级（14N型溶液）（Aldrich）；（*例如，1mL 浓度100 mM的溶液/2L流动相）。3结果与讨论 该法具有良好的线性关系（图3），并且可以很容易地测定从麻醉大鼠皮层获得的微透析灌流液的多巴胺和血清素的基础水平（图4）。 本应用注解描述了一种分析多巴胺和血清素既快速又灵敏的方法。微透析样品常规下可在5分钟内完成多巴胺和血清素的分析灵敏度在2飞摩尔左右。这种方法和许多微径柱的灵敏度相当，但比常规的色谱柱分析方法更成熟，因此比微径柱的方法也更实用。由于低应用电压和扫描电极，多巴胺和血清素的选择性能够很好的保持。此外，这个方法还可以进行在线自动微透析实验。 图1 多巴胺和血清素标样的分离图谱 (500 fg On Column 150pM; 5nAFS).图2