巴西蜂胶和中国蜂胶对比检测报告.doc

巴西蜂胶和中国蜂胶对比检测报告*蜂产品研究中心2015年11月20日一、 样品来源及描述1 巴西蜂胶：Bioessens1：绿色蜂胶，块状;Bioessens2：棕绿色，块状;Bioessens3：棕色，块状。2 中国蜂胶：深棕色，块状。二、样品处理将蜂胶至于4冰箱中8小时，然后用粉碎机将其粉碎成20目颗粒，塑料袋密封至于冰箱中备用。三、测定方法1提取率的测定方法参考GBT242832009（5.3.2）标准测定。具体如下：1.1原理称量乙醇不溶物质量，用减量法计算其占样品质量的百分比。1.2试剂和材料a) 乙醇: 分析纯（95%）;b) 定量滤纸12.5cm。1.3仪器a) 天平(感量0.001g)；b) 100ml烧杯；c) 电热鼓风干燥箱；d) 超声波仪；e) 玻璃漏斗60nm；f) 玻璃棒；g) 250ml锥形瓶；h) 称量瓶70mm35mm；i) 干燥皿。1.4方法步骤：准确称取经过粉碎处理的四种蜂胶样品各5g（称准至0.001g），分别置于100ml烧杯中，加适量95%乙醇，放入超声波仪中超声，使样品溶解，将上清液倒入事先干燥称重过的滤纸及玻璃漏斗过滤到锥形瓶中，反复数次，直至完全溶解，再用少量乙醇洗涤100ml烧杯及滤纸两次。然后将残渣及滤纸与玻璃漏斗在50下干燥至恒重。在相同条件下作平行试验。1.5计算按式（1）计算： X1=（m1-m2）/m1100% (1)式中：X1样品中乙醇提取物含量，%； m1样品质量，单位为克（g）； m2残渣质量，单位为克（g）； 平行试验允许误差不超过1.5%，取三次测定的平均值。2总黄酮的测定方法参考GBT242832009（5.3.3）标准测定。具体如下：2.1试剂和材料a) 聚酰胺粉（100目）；b) 芦丁标准液：取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至100ml，即得50g/ml；c) 乙醇：分析纯（95%）；d) 甲醇：分析纯（95%）；2.2仪器a) UV75IGD紫外/可见光分光光度计(上海分析仪器厂)；b) 层析住：350mm（长）15mm（内径），具活塞、砂芯、抽气嘴、圆底烧瓶;c) 容量瓶：10ml；d) 移液器：100l1000l；e) 移液管：1ml5ml；f) 玻璃蒸发皿：90mm。2.3方法步骤a) 试样处理：称取蜂胶乙醇提取物0.5g于容量瓶中，用乙醇定容至100ml，摇匀后，超声提取20min，放置，用移液管吸取上清液1ml于玻璃蒸发皿中，加入5ml乙醇及1g聚酰胺粉，用玻璃棒混匀吸附，于60水浴上挥去乙醇，然后转入关闭活塞的层析柱中。量取20ml苯液，清洗玻璃蒸发皿再将苯液转入层析柱中，分3次完成。15min后开启层析柱活塞，弃去苯液并关闭层析柱活塞，取下圆底烧瓶，将25ml容量瓶装于层析柱下方。量取20ml甲醇，分3次清洗玻璃蒸发皿，再将甲醇转入层析柱中，15min后开启层析柱活塞将黄酮洗脱于25ml容量瓶中，用甲醇定容至25ml。此液置1cm比色皿中于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，用标准曲线法定量。b)芦丁标准曲线：分别吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，置1cm比色皿中于波长360nm测定吸收值，绘制标准工作曲线，计算回归方程。2.4计算和结果表示按式（2）计算： X2= （2）式中：X2试样中总黄酮的含量，单位为毫克/每百克（mg/100g）;A由标准曲线算得被测液中黄酮量，单位为微克（g）;V2试样定容总体积，单位为毫升（ml）；V1吸取的上清液体积，单位为毫升（ml）；m3试样质量，单位为克（g）。计算结果保留二位有效数字。3抗氧化测定方法3.1材料与试剂a) DPPH（90%，Sigma生产）;b) 甲醇:分析纯（95%）;3.2仪器UV75IGD紫外/可见光分光光度计(上海分析仪器厂)。3.3方法步骤a) 配置浓度均为1mg/ml的四种蜂胶的甲醇溶液：准确称取0.1g蜂胶提取物于容量瓶中，用甲醇定容至100ml待用。b) 配制浓度为0.025mg/ml的DPPH溶液：准确称取0.0025g DPPH试剂，用甲醇溶解并定容至100ml待用。c) 分光光度法评价不同蜂胶对DPPH自由基的清除作用:参考larrauri1和yokozawa2的方法进行改进。分别吸取0.05、0.15、0.25ml的四种蜂胶溶液（1mg/ml）,加入0.025mg/ml的DPPH甲醇溶液4ml，室温下避光放置30min后于517nm处测定吸光值。在相同条件下作平行试验。3.4计算与结果DPPH的清除率通过下式计算：清除率（）= (A0-A)/A0100式中： A0空白试剂吸光值；A不同梯度溶液吸光值。四、结果1 巴西蜂胶与中国蜂胶的乙醇提取率样品提取率中国蜂胶57.77%Bioessens159.42%Bioessens255.64%Bioessens360.08%2巴西蜂胶与中国蜂胶的总黄酮含量样品总黄酮含量（%）中国蜂胶23.3bioessens18.81bioessens210.12bioessens310.383巴西蜂胶和中国蜂胶对DPPH自由基的清除率清除率（%）0.05 mL0.15 mL0.25 mL中国蜂胶40.490861.196371.6258Bioessens138.803762.730171.319Bioessens239.417261.503170.3988Bioessens333.895762.423371.9325参考文献：1. Larrauri J A,Sanchez Moreno C,Saura Calixto F.Effect of extracts from red and white grape pomace peelsJ.Agric Food Chem,1998,46:2143.2 Yokozawa