检验仪器维修与使用血凝分析PPT课件.ppt

血凝分析,.,第一节 血凝分析理论知识,一、血管壁的止血功能 二、血小板的止血功能 三、抗凝及纤溶系统,一、血管壁的止血功能,血管受损 血管收缩 止血 血液粘稠 止血 内皮细胞 PLT黏附聚集 止血 TXA2 5-HT 释放 暴露内皮下胶原 激活 内源性凝血 止血 TF释出 外源性凝血 止血,神经反射,内皮素 血管紧张素,vWF,二、血小板的止血功能,初期止血功能 二期止血功能,三、抗凝及纤溶系统,细胞的抗凝机理 体液的抗凝机理,一、生理性止血的基本过程 1、血管收缩 2、血小板血栓形成 3、血液凝固 血液凝固是由凝血因子按一定顺序相继激活而生成的凝血酶最终使纤维蛋白原变为纤维蛋白的过程。因此，凝血过程可分为凝血酶原酶复合物的形成、凝血酶原的激活和纤维蛋白的生成三个基本步骤。,出血与凝血机制,出血与凝血机制,生理性止血过程示意图 5HT：5羟色胺，TXA2:血栓烷A2,二:凝血过程 凝血酶原酶复合物可通过内源性凝血途径和外源性凝血途径生成。,胶原,生理性止血系统（包括血管壁、血小板、凝血系统）和抗凝系统（包括纤溶系统、凝血调节系统）处于相互制约、动态平衡状态，始终维持着血管内血液畅通。,凝血因子一览表,凝血因子,维生素K依赖的因子：、 不存在于血清中的因子：、 对凝血酶敏感因子：、 在血浆中贮存不稳定的因子： 、 因子,习惯上称组织因子（TF），是正常人血浆中唯一不存在的凝血因子。 vWF，是一个不属于14个凝血因子范畴，但参与凝血过程的蛋白质。,凝血机制（瀑布学说）,PK K(激肽释放酶) HMWK(高分子量激肽原) 体内外表面接触, a,TF Ca2+ a, a,a PF3 Ca2+ a,血管损伤TF释放,a PF3 Ca2+ a,a,Fg,Fb,交联Fb,a,凝血途径 （简化）,纤维蛋白原：1,Fibrin,凝血酶原,出血与凝血机制,1内源性凝血途径 内源性凝血途径是指参加的凝血因子全部来自血液(内源性)。 临床上常以活化部分凝血活酶时间(APTT)来反映体内内源性凝血途径的状况。 内源性凝血途径是指从因子激活，到因子X激活的过程。当血管壁发生损伤，内皮下组织暴露，带负电荷的内皮下胶原纤维与凝血因子接触，因子即与之结合，在HK和PK的参与下被活化为a。在不依赖钙离子的条件下，因子a将因子激活。在钙离子的存在下，活化的a又激活了因子。单独的a激活因子X的效力相当低，它要与a结合形成1：1的复合物，又称为因子X酶复合物。这一反应还必须有Ca2+和PL共同参与。,2 、 外源性凝血途径,外源性凝血途径：是指参加的凝血因子并非全部存在于血液中，还有外来的凝血因子参与止血。 这一过程是从组织因子暴露于血液而启动，到因子被激活的过程。临床上以凝血酶原时间测定来反映外源性凝血途径的状况。 组织因子是存在于多种细胞质膜中的一种特异性跨膜蛋白。当组织损伤后，释放该因子，在钙离子的参与下，它与因子一起形成1：1复合物。一般认为，单独的因子或组织因子均无促凝活性。但因子与组织因子结合会很快被活化的因子激活为a，从而形成a组织因子复合物，后者比a单独激活因子增强16000倍。 外源性凝血所需的时间短，反应迅速。外源性凝血途径主要受组织因子途径抑制物(TFPI)调节。TFPI是存在于正常人血浆及血小板和血管内皮细胞中的一种糖蛋白。它通过与因子a或因子a-组织因子-因子a结合形成复合物来抑制因子a或因子a-组织因子的活性。,一期止血缺陷特征,一期止血缺陷指血管壁和血小板的缺陷。 皮肤、粘膜出血为主，内脏出血少见。 创伤后即刻出血，持续时间较长。 压迫止血有效，止血后不易复发。 输血或输血制品效果差,常用筛选试验如下： 毛细血管抵抗力试验（CRP） 出血时间（BT） 血小板计数（PLT） 血块收缩试验(CRT),二期止血缺陷特征,凝血机制和抗凝机制缺陷 深部组织和关节、肌肉或内脏出血难止为主。 创口延迟性出血难止，持续时间较长。 压迫止血效果欠佳 输血制品有效，但易复发。,二期止血缺陷,常用筛选试验如下： 活化的部分凝血活酶时间（APTT） 凝血酶原时间（PT） 纤维蛋白原含量测定（Fg） 凝血酶时间（TT）,第二节 仪器检测原理,血凝仪可进行血栓与止血的实验室检查。 可为出血性和血栓性疾病的诊断、溶栓以及抗凝治疗的监测及疗效观察提供有价值的指标。,血凝仪的发展历史,1910年，Kottman发明了血凝仪。 1950年，Schnitger和Gross发明了基于电流法的血凝仪。 20世纪60年代为血凝仪的初级阶段。 20世纪70年代，各种血凝仪问世。 20世纪80年代末，多通道、多种分析方法与原理的半自动血凝仪相继诞生。 20世纪90年代以来，多通道、多方法、多功能全自动血凝仪不断涌现。,血栓与止血的基本检测指标 ： PT 凝血酶原时间 APTT 活化部分凝血活酶时间 FIB 纤维蛋白原 TT 凝血酶时间 D-Dimer D-二聚体 AT- 抗凝血酶 内原性凝血因子 外原性凝血因子 PC 蛋白C PS 蛋白S,血凝仪基本检测方法,生物物理法 生物物理法亦可称为凝固法。通过检测血浆在凝血 激活剂的作用下光、电、机械运动等一系列变化，再由 计算机采集分析数据得出最终结果。由于是检测血浆在 凝固过程中的物理变化，因此该法 也可称为生物物理法。 电流法(已淘汰) 当一定时间后血浆中纤维蛋白形成，电极 向上移动时可钩起纤维蛋白丝。此时由于 纤维蛋白丝的存在，电路仍处于接通状态 即可判断为凝固终点。,散射比浊法 如图所示，散射比浊法当待测血浆中纤维蛋白凝块形成时，来自发光二极管的光被其散射。接收器接收散射光并将其转变成电信号。,生物物理法 光学法 光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为散射比浊法和透射比浊法两种。,生物物理法 光学法 光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为散射比浊法和透射比浊法两种。,散射比浊法 由经过放大处理后的电 信号产生的血浆凝固曲线如 图所示。取整个测量过程中 随时间变化的散射光强度为 100 %，计算从测定开始至 散射光强度增加到50%时所 对应的时间为凝固点。,生物物理法 光学法 光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为散射比浊法和透射比浊法两种。,透射比浊法 如图所示，透射比浊法 的光源与接收器呈直线排列。 当待测血浆中纤维蛋白凝块 形成时，来自发光源的光强 度被其吸收。接收器将变化 的光强度转变成电信号。,生物物理法 光学法 光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为散射比浊法和透射比浊法两种。 透射比浊法 仪器的数据处理部分连 续记录样品的吸光度变化曲 线，计算出单位时间内吸光 度的变化量，并以每分钟吸 光度的变化量来报告结果。,生物物理法 双磁路磁珠法 在待测血浆中加入小铁珠，如图 所示。测试杯两侧的驱动线圈产生一 恒定的交变电磁场，使杯内的小钢珠 保持等幅运动。凝血激活剂加入后， 纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度 增加，迫使小钢珠的运动幅度逐步减 弱。当运动幅度衰减到先前的50%时， 可确定为凝固终点。,磁珠法检测系统简介 磁珠法检测用于凝固法是Stago的专利技术，如图所示。,一旦被测血浆开始凝固（ 加入激活试剂）血浆黏度增加 使钢球的运动速度减慢，振幅 减小。 测量线圈检测到此振幅的 变化并通过计算得到凝血时间。,生物化学法 这类方法主要是通过测定产色物质的吸光度变化，以推算待测物质的含量。这类方法也称为底物显色法。 人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的多肽底物，且多肽底物连接上产色物质。 在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。 产色物质一般选用连接对硝基苯胺（PNA）。 游离的PNA呈黄色，其测定波长选用405nm。,生物化学法 凝血分析仪使用产色物质在检测血栓止血指标时的生化反应对酶的检测如下所示： 在含酶的样品中直接加入合成物质，因为酶可裂解合成物质释放 PNA，监测由于PNA释放而导致被检样品在405nm处光吸收的变化， 就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测,凝血酶样本,多肽+PNA,合成物质,间接得到 酶的含量,光电比色,免疫学方法 免疫学方法是以被检测物质作为抗原，然后用免疫 动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异性结 合反应来对被检测物质进行定量检测。自动凝血仪多采 用免疫比浊法。,三、血凝仪的基本结构,1.半自动血凝仪的基本结构,2、全自动血凝仪的基本结构 1.样本传送及处理装置 样本传送及处理装置通常包括：自动进样系统、自动穿盖系统、及样本条形码扫描系统。 2.试剂冷藏及测试杯供应系统 试剂冷藏位可以提供几十个试剂位置并提供一个8-10度低温环境。测试杯供应系统则为每一个测试提供测试杯，并在测试完成后将测试杯自动抛弃。 3.样本及试剂分配系统 样本及试剂分配系统通常包括：样本臂、试剂臂及样本注射器、试剂注射器，样本及试剂针，冲洗池。,4.检测系统 仪器检测系统通常包括两种以上的检测方法：双磁路磁珠法、散射比浊法、透射比浊法、底物显色法等等。 5.计算机系统 系统软件控制凝血仪的所有工作过程，并将检测到的数据进行分析处理最终得到测试结果。对检测结果进行存储、质控统计等工作 6.输出设备 通过计算机屏幕或打印机输出测试结果。,四、血凝仪的检测项目,凝血系统的检测 P165 2. 抗凝系统的检测 3. 纤维蛋白溶解系统检测 4. 临床用药的监测, 多方法、多功能、快速高效； 智能化程度高，软件开发进一步完善； 全自动血凝分析仪工作站； 床旁分析； 在临床中的应用日趋广泛。,主要体现在：,五、血凝仪的发展和应用展望,第三节 血凝分析临床应用,凝血四项：PT、APTT、Fbg、TT 检测出血性疾病 检测血栓性疾病 手术前止血功能检查 临床抗凝治疗监测 弥漫性血管内凝血的检测,标本采集,病人准备：药物影响。 抗凝药、抗血小板药、溶栓防栓药，如APC、避孕药。 抗凝： 抗凝剂：109mmol/L枸橼酸钠1:9 试管：真空抗凝管、塑料试管 注意事项：采血顺利、混匀充分；立即送检，2h完成。,反应总原理,Fibrinogen,Fibrin,PT(凝血酶原时间) APTT（活化部分凝血活酶时间） Fib（纤维蛋白原） TT（凝血酶时间）,病人血浆,不同反应试剂,检测血浆凝固的时间,凝血酶原时间PT,反映外源性凝血途径中II、V、VII、X因子水平的实验。,凝血酶原酶复合物,反映外源凝血的筛选实验,1、原理：一步凝固法：在抗凝血中，加入过量的组织凝血活酶（含TF）和适量的钙离子，即可满足外源性凝血的全部条件。从加入试剂到血浆到血浆开始凝固所需的时间即血浆凝血酶原时间。 参考范围 平均值为（121）s，超过正常对照值3s 为异常。,凝固时间,血浆,组织凝血活酶（TF） Ca2+,PT的临床意义,PT延长： 先天凝血因子异常,如I、II、V、VII、X因子中某一项或几项因子水平缺乏。可用于外源凝血因子缺陷的筛查。 后天凝血因子缺乏，如肝脏疾病、肝硬化（大多数凝血因子由肝脏合成）、维生素K缺乏（可见于阻塞性黄疸）。可用作肝脏蛋白质合成功能的检测手段。 DIC后期(由于大量消耗和产生的FDP拮抗凝血酶的作用使PT延长，因此可用作DIC的检测）、口服抗凝药（可密定、华法林，PT最敏感）、肝素等。 PT缩短： 高凝状态：DIC早期，心梗、脑血栓形成，深静脉血栓形成，口服避孕药，PT时间缩短，但并不常见。,1.凝血酶原时间比值（PTR） PTR = PT受检 /PT对照 参考值为0.851.15 2.国际标准化比值（INR） （WHO规定口服抗凝剂患者的报告方式） INR= PTRISI ，参考值为0.-1. ISI：国际敏感指数,INR,采用INR监测和调整口服抗凝药物的剂量，使不同来源的临床资料具有可比性 WHO规定不同情况下抗凝治疗时合适的INR范围 1术前2周或口服抗凝药INR1.53(2.25) 2原发、继发性静脉血栓的预防 INR2.33.0(2,5) 3 活动性静脉血栓、反复静脉血栓、肺栓塞 预防INR2.04.0(3.0) 4动脉血栓预防INR.5(3.5) 5INR缩短：表示高凝状态。,不适用INR的三种情况,INR不适用于测定口服抗凝药初期的病人血浆 INR不适用于肝病凝血因子缺陷病人的血浆 INR不适用于非抗凝治疗 而PT延长的病人血浆。,活化部份凝血活酶时间APTT,是反映内源性凝血途径中VIII、IX、XI、XII因子水平的实验，APTT只反映因子水平，并不反映凝血因子是否活化。,反映内源凝血的筛选实验,原理：在抗凝血浆中，加入过量的活化接触因子激活剂（如白陶土）和部分凝血活酶（代替血小板磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆开始凝固所需的时间即为活化部分凝血活酶时间。 参考范围 32-43秒，受检者较正常对照值延长10s以上才有意义。,白陶土（接触因子激活剂） 部分凝血活酶（脑磷脂） Ca2+,凝固时间,血浆,APTT的临床意义,APTT延长： 、和因子中某一项或几项因子水平缺乏；血友病甲、血友病乙。 肝脏疾病、肝硬化、DIC后期继发纤溶亢进时，敏感性略差。 肝素治疗的监护： 一般在肝素治疗期间，APTT维持在正常对照的1.5-2.5倍适宜。 溶栓治疗时，ATPP与PT、TT应将值控制在正常值的2倍。 APTT缩短： 见于血液呈高凝状态，DIC早期、血栓前状态、血栓性疾病。,血浆纤维蛋白原测定 Fbg,检测原理：血浆中加入过量的凝血酶，使纤维蛋白原变成纤维蛋白。 参考值：2-4g/L 意 义 减少： 1先天性纤维蛋白原缺乏症，原发性Fg减少、原 发纤溶 2DIC晚期（消耗过多） 3严重肝病 增高： 1高凝状态：血栓性疾病，急性炎症、手术创 伤、恶性肿瘤等 (Fg是急性时相蛋白) 2生理性：部分正常老人，妊娠晚期,凝血酶时间TT 反映共同途径是否存在抗凝或纤溶亢进,血浆,凝固时间,标准凝血酶,原理：在抗凝血浆中加入“标准化”凝血酶溶液，直接将纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定血浆开始凝固所需的时间。 参考范围：16-18秒， 以超过正常对照3秒以上为有病理意义,TT的临床意义,TT延长 1、血浆纤维蛋白原水平低下，如低(无)纤维蛋白原血症，异常纤维蛋白原血症等。(FIB减少时TT延长) 2、 循环中有抗凝血酶活性增高