支原体PPT课件.ppt

支原体 Mycoplasma,1,第一节 概述,支原体（Mycoplasma）,缺乏细胞壁，呈高度多形性 能通过滤菌器 能够在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物,2,柔膜体纲,支原体目,肺炎支原体，人型支原体，生殖支原体，穿透支原体，发酵支原体，梨支原体等,解脲脲原体,分类,支原体科,无胆甾原体科,螺原体科,支原体属,脲原体属,3,形态染色,细胞个体小，直径0.3-0.5 mm。 无细胞壁，只有细胞膜，呈高度多形性。 革兰氏染色阴性，不易着色。,4,细胞膜结构,细胞膜厚度7.5-10 nm，有外、中、内三层。 内外两层为蛋白质及多糖 中间层为含胆固醇的脂质成分 凡能作用于胆固醇的物质，如皂素、毛地黄甙、二性霉素B等均能破坏细胞膜，使支原体死亡。 有的支原体有荚膜、特殊的顶端结构等。,5,特殊的顶端结构,肺炎支原体、生殖支原体、穿透支原体等具有特殊的顶端结构，呈烧瓶状。 顶端结构具有黏附于宿主上皮细胞表面的作用，与支原体的致病性有关。,6,培养特性,营养要求： 高于一般细菌，培养基中需加入血清以提供胆固醇与其它长链脂肪酸，多数支原体还需添加酵母浸液、组织浸液、核酸提取物和辅酶。 pH： 适宜pH为7.6-8.0，低于7.0时易死亡。但解脲脲原体最适pH为6.0-6.5。,7,培养特性,氧气： 兼性厌氧，但大多数寄生性支原体在37时在微氧环境（含5% CO2和90% N2）中生长最佳。 繁殖方式： 通常以二分裂繁殖，也可以出芽、分枝、断裂等方式增殖。,8,菌落形态,支原体生长缓慢，3-4 h繁殖一代。在固体培养基中培养48-96 h 形成菌落。 在琼脂含量较少的固体培养基上，2-7天后形成“荷包蛋”样菌落（“fried egg” colony）。 菌落中心致密隆起，深入琼脂，周边为较薄的透明颗粒区。,9,支原体典型菌落,10,液体培养基： 清亮，用颜色变化单位（CCU）表示。,肺炎支原体培养结果 1. 培养基对照；25. 肺炎支原体培养第25天,1 2 3 4 5,11,支原体与细菌L型,支原体有许多特性与细菌L型相似,无细胞壁，呈多形性 能通过滤菌器 对青霉素不敏感，对低渗敏感 “荷包蛋”样菌落 临床表现相似，为间质性肺炎等。,12,支原体与细菌L型的区别,13,生化反应,14,抗原结构,支原体抗原结构主要来自细胞膜，由蛋白质和糖脂组成。 不同支原体均有其特有的抗原结构，交叉较少，在鉴定支原体时有重要意义。,15,抗原结构 补体结合试验可检测糖脂类抗原 ELISA试验可检测蛋白质类抗原 血清抗体鉴定： 生长抑制试验（growth inhibition test, GIT） 代谢抑制试验（metabolic inhibition test, MIT）,16,抵抗力,抵抗力比细菌弱，易被脂溶剂及常用消毒剂杀灭，对紫外线、低渗、干燥及热敏感。 对醋酸铊、结晶紫和亚碲酸钾抵抗力强。 对影响细胞壁合成的抗生素不敏感。对干扰蛋白质合成的抗生素和阻碍DNA复制的药物敏感。,17,致病性,黏附素、荚膜、毒性代谢产物、超抗原、其他：如穿透支原体黏附侵入CD4T细胞引起损伤。,支原体主要寄生于细胞外，一般为表面感染，大多不侵入血液及组织细胞内。,致病物质:,18,固有免疫 适应性免疫 体液免疫： 抗膜蛋白的抗体包括IgM、IgG和SIgA。 细胞免疫： 主要是特异性CD4Th1 细胞分泌细胞因子。,免疫性,以体液免疫为主，细胞免疫也起作用。,19,第二节 主要病原性支原体,肺炎支原体 Mycoplasma Pneumoniae 解脲脲原体 Ureaplasma Urealyticum 穿透支原体 Mycoplasma Penetrans,20,肺炎支原体,菌体大小为0.2-0.3 mm，呈短细丝状,具有特殊的顶端结构。位于该结构表面的P1蛋白，是肺炎支原体与宿主细胞膜受体结合的部位。P1表面蛋白（170 kDa）和P30（32 kDa）为主要的黏附蛋白。,21,肺炎支原体,22,生物学特性,初次分离应在含血清和新鲜酵母浸出液的培养基中，一般10天左右长出菌落，多次传代后生长加快。 产生过氧化氢和溶血素。 能发酵葡萄糖，不分解精氨酸与尿素。,23,致病性与免疫性,主要侵犯呼吸系统 传播途径：通过飞沫传播 夏末秋初为多发季节，以5-20岁青少年发病率最高。 流行特点为间歇性。每4-6年出现地区性流行，流行持续数月至一年。,24,所致疾病,引起的病理改变以间质性肺炎及急性细支气管炎为主，又称原发性非典型性肺炎（primary atypical pneumonia）。 临床以咳嗽、发热、头痛、咽痛和肌肉痛为主。 有时有呼吸道外并发症，如皮疹、心血管和神经系统症状。,25,免疫性 血清特异性IgM、IgG及SIgA和致敏的淋巴细胞； 呼吸道局部黏膜产生的SIgA对防止再感染有较强 保护作用； 出现IgE介导的I型超敏反应，促使哮喘病急性发作。,致病性与免疫性,26,血清学检查 冷凝集试验 用病人血清与人O型血红细胞或自身红细胞混合，4过夜时可发生凝集，而在37时凝集又分散解离开，但仅50左右的患者才出现阳性。此反应为非特异性。 快速诊断 ELISA：检测P1和P30蛋白mAbs。 PCR：从痰标本中检测16S rRNA或P1蛋白基因。,27,微生物学检查,PCR,分离培养 37，1-2周,典型菌落,鉴定,生化反应,形态染色,GIT, MIT,标本,DNA测序,ELISA,28,防治原则,疫苗的预防效果尚无定论。 治疗首选大环内酯类抗生素。 青霉素类及头孢类抗生素无效。,29,人型支原体,（一）生物学性状 分解精氨酸。最适pH7.27.4； 固体培养基上形成200300 m的菌落，呈典型 的“油煎蛋”状。 （二）致病性 寄居于泌尿生殖道，通过性接触传播，可引起附睾炎、盆腔炎、产褥热等； 新生儿感染则可引起肺炎、脑炎和脑脓肿。,30,（三）微生物学检查法,人型支原体在液体培养基中的生长 左图：培养基对照； 右图：人型支原体分解精氨酸产碱，酚红指示剂变红。,病原体检测 液体和固体培养基接种； 特异抗血清做GIT与MIT进一步鉴定。,31,核酸检测 PCR检测： 检测16S rRNA基因。此法快速、特异，适宜于大批量标本检测。,32,预防： 加强宣传教育，注意性卫生，切断传播途径。 治疗： 人型支原体对大环内酯类抗生素不敏感，对红霉素（100 mg/L）不敏感； 可用四环素类、喹诺酮类药物治疗，但有耐药株产生。,（四）防治原则,33,生殖支原体,生殖支原体基本形态为烧瓶状，能发酵葡萄糖使培养基变酸； 培养基上不生长，须在无醋酸铊SP-4培养基生长但缓慢，菌落呈典型的“油煎蛋”状； 顶端结构有黏附素MgPa，140 kDa，能黏附在人泌尿生殖道上皮，主要引起尿道炎； 较难培养，生长慢，不适宜于常规实验室分离培养。实验室最好的诊断方法是核酸检测。,34,穿透支原体,1991年Lo首次从1例艾滋病患者尿中分离出一种新支原体，其形态为杆状或长烧瓶状，一端为顶端结构，具有黏附与穿入的作用。,穿透支原体电镜照片,穿透支原体黏附并穿入红细胞,35,穿透支原体发酵葡萄糖，分解精氨酸，不分解尿 素，在SP-4培养基上生长形成典型的“油煎蛋” 状菌落； 顶端结构能黏附于人红细胞、单核细胞、CD4T 淋巴细胞及人尿道上皮细胞，导致宿主细胞受损 或死亡； 可能是艾滋病发病的一个辅助因素。,36,解脲脲原体,单个或成双排列，直径0.05-0.3 mm，丝状体少见。 固体培养基中菌落小，直径15-60 mm。,37,生物学特性,培养需要胆固醇和酵母浸液。 pH要求较低，最适pH为6.0-6.5。 具有尿素酶，能分解尿素产生氨和CO2，使培养基pH升高。 不分解糖类和精氨酸。,38,致病性,传播途径：性传播、垂直传播。 引起非淋菌性尿道炎（non-gonococcal urethritis，NGU）、前列腺炎、附睾炎等泌尿生殖道疾病。 还与自然流产、早产、死胎和不孕有关。,39,微生物学检查,PCR,液体培养基（含有酚红和尿素）,标本,典型菌落,鉴定,生化反应,GIT，MIT,阳性（红色）,阴性（黄色）,固体培养基 37、5%CO2、90%N2,DNA测序,40,微生物学检查与防治原则