岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪标准操作规程.doc

岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪标准操作规程 SOP-QC-2016-01GMP工作标准 题 目：岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪标准操作规程SOP-QC-2016-01制 定 人：审 核 人：批 准 人：制定日期：审核日期：批准日期：颁发部门：质管部颁发数量： 2 份执行日期：分发部门：化验室、档案室、OA电子文稿目的：规范岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪的操作使用。范围：岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪。职责：化验人员负责执行，化验室主管负责监督实施。内容：1 系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、CTO-10AS柱温箱、CBM双通道数据传送仪、CS-Light色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。2 准备2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45m滤膜过滤（水相用水系膜，有机相用有机膜），超声脱气20min。2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45m滤膜过滤。2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。3 开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器、数据传送仪、柱温箱（有温度要求时开启），待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站，双击CS-Light Real Time Analysis 1 按钮。4. 参数设定4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需波长值，按Enter键确认。按CE键退出到初始屏幕。4.2 流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按Enter键确认。按CE键退出。4.3 流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按conc键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按Enter键确认。按CE键退出。4.4 梯度设定4.4.1 在A泵显示初始屏幕时，按edit键，Enter键。4.4.2 用数字键输入时间，按Enter键，重复按func键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按Enter键，用数字键输入设定值，按Enter键。4.4.3 重复上一步设定其它时间步骤。4.4.4 用数字键输入停止时间，重复按func键直至屏幕显示STOP，按Enter键。按CE键退出。5 更换流动相并排气泡5.1 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中。5.2 逆时针转动A/B泵的排液阀180，打开排液阀。5.3 按A/B泵的purge键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止。5.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。5.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按pump键，冲洗3min后再按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。6 平衡系统6.1 按CS-Light色谱中文数据系统参考手册打开“在线色谱工作站CS-Light Real Time Analysis 1 按钮”，点击单次分析，输入实验信息并设定各项方法参数后，通过放大和缩小功能查看基线。6.2 等度洗脱方式6.2.1 按A泵的pump键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按5.6操作。6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。6.3 梯度洗脱方式6.3.1 以检验方法规定的梯度初始条件，按6.2项下方法平衡系统。6.3.2 在进样前运行1-2次空白梯度。方法：按A泵的run键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。7 进样7.1 待基线平衡后，按检测器zero键调零，点击软件中 CBM调零校正基线零点，点击样品记录 填写样品信息，点击开始向CBM数据传送仪发出指令，等待进样。7.2 用试样溶液清洗进样针，并排除气泡后抽取适量试样液，定量环进样抽取溶液量应远大于定量环的容积（定量环的容积3倍以上），进样阀处于inject状态下，插入进样针，旋转至load状态，注入样品液，再旋转至inject状态完成进样，拔下进样针。8 数据处理参见CS-Light色谱中文数据系统参考手册。进样结束，数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下退出系统，关闭软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。9 清洗系统和关机9.1 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。9.2 清洗进样阀，用启动注射器吸10ml超纯水，将注射针导入口冲洗头连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上 使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。9.3 清洗柱9.3.1 C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。9.3.2 使用缓冲盐流动相，用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。9.3.3 清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、UPS，断开电源。9.3.4 填写使用记录。10 岛津液相色谱仪注意事项10.1 流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质（使用0.45um或更细的膜过滤）。10.2 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。10.3 不能用纯乙醇作为流动相，这样会使单相阀粘住而导致泵不进液。10.4 使用缓冲液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗染店40分钟以上以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20分钟以上。10.5 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如甲醇），因为纯水易长霉。10.6 每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。10.7 C18柱绝对不能进蛋白样品，血样，生物样品。10.8 堵塞导致压力太大，按预柱混合器中的过滤器管路过滤器单向阀检查并清洗。请洗方法：以异丙醇做作溶剂冲洗，放在异丙醇中间用超声波清洗用10%稀硝酸清洗。10.9 气泡会导致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。10.10 如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液，通常在输液前要进行流动相的清洗。10.11 要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。10.12 更换流动相时应该先将吸