第十二章螺旋体支原体衣原体立克次体鉴定

,微生物学检验,第十二章螺旋体、支原体、衣原体、立克次体鉴定,返回总目录,本 章 内 容,学习目标及重点,学习目标： 掌握钩端螺旋体和梅毒螺旋体生物学特性及微生物学检验，支原体的生化反应鉴别及微生物学检验，衣原体的微生物学检验熟悉支原体与细菌的L型的区别，立克次体的微生物学检验了解螺旋体、支原体、衣原体、立克次体的临床意义本章重点： 钩端螺旋体和梅毒螺旋体的微生物学检验 支原体的微生物学检验 衣原体的微生物学检验,第一节 螺旋体,一、钩端螺旋体（一）生物学特性 1.形态与染色 钩端螺旋体螺旋细密而规则，以致在光学显微镜下看不清螺旋，其特点是菌体一端或两端弯曲呈钩状，菌体呈问号状或C、S形,A：Fontana镀银染色法；B：暗视野显微镜,2.培养特性 生长缓慢，常用含10%兔血清的柯氏（Korthof）培养基培养在液体培养基中，28培养1周左右，肉眼可见半透明云雾状混浊固体培养基上，28培养2周左右，可形成透明、不规则的扁平菌落非致病菌株13可生长，以此可鉴别致病株3.抗原构造 钩端螺旋体主要有属特异性抗原、群和型特异性抗原4.抵抗力 对酸、碱敏感，对热抵抗力弱,第一节 螺旋体,（二）微生物学检验直接镜检 将标本离心后用暗视野显微镜检查，或经Fontana镀银染色用普通光学显微镜检查，亦可用直接免疫荧光法检查2. 分离培养 血、尿标本接种Korthof培养基3. 血清学检查 一般用发病初期和发病第34周双份血清，检测抗体效价的变化4. 动物试验 是分离钩体的敏感方法，尤其适用于有杂菌污染的标本,第一节 螺旋体,（三）临床意义 钩端螺旋体具有内毒素样和溶血素等致病物质，引起人和动物钩端螺旋体病，是一种自然疫源性疾病病后对同型钩体菌株有持久的免疫力，以体液免疫为主预防钩端螺旋体病，应积极防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜管理易感人群或流行疫区人群接种灭活多价钩体疫苗，加强特异性预防。对病人治疗首选青霉素，其次为庆大霉素、强力霉素等,第一节 螺旋体,二、梅毒螺旋体（一）生物学特性1. 形态与染色 梅毒螺旋体呈锐角弯曲且规则致密的螺旋，两端尖直，用暗视野观察其活泼运动方式有助于与其他螺旋体的鉴别。用Fontana镀银染色，呈棕褐色,A：Fontana镀银染色法；B：暗视野显微镜,第一节 螺旋体,2. 培养特性 不能在无生命人工培养基中生长繁殖3. 抵抗力 梅毒螺旋体的抵抗力很弱（二）微生物学检验1.标本 下疳分泌物、病损组织小块及皮疹、淋巴结穿刺洗涤液、血液等2.鉴定（1）直接检查 暗视野显微镜检查、镀银染色、直接荧光抗体检测法（2）血清学诊断试验,第一节 螺旋体,临床以非梅毒螺旋体抗原血清试验进行过筛试验，以梅毒螺旋体抗原血清试验做确认试验,第一节 螺旋体,（三）临床意义 自然情况下，梅毒螺旋体只感染人，人是唯一的传染源。主要经过直接接触传播或间接接触（如输血）传播引起获得性梅毒，另外也可经胎盘垂直传播，引起胎儿先天梅毒,锯齿形牙,马鞍鼻,第一节 螺旋体,1.获得性梅毒 分为三期，以反复、潜伏和再发为特点2.先天性梅毒 又称胎传梅毒，多发生于妊娠4个月，系母体梅毒螺旋体通过胎盘进入胎儿体内，可致胎儿全身感染，引起流产、早产或死胎3.免疫与防治 人体对梅毒无先天免疫力，机体对梅毒螺旋体的免疫主要是传染性免疫。预防着重是加强卫生宣传教育，梅毒确诊后，应及早进行彻底治疗，治疗主要选用青霉素,第一节 螺旋体,三、其他常见螺旋体1.伯氏疏螺旋体2.回归热疏螺旋体3.奋森疏螺旋体,返回章内容,第一节 螺旋体,第二节 支原体,一、生物学特性1. 形态与染色 因为没有细胞壁，呈高度多形态性。常用姬姆萨（Giemsa）染色，呈淡紫色2. 培养特性 支原体的营养要求较一般细菌高，对低渗透压敏感,在含1.4%琼脂的固体培养基上培养，菌落呈圆形、光滑、边缘整齐，有时形成较为典型的“油煎蛋”样菌落，其核心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄薄的透明区。,3. 生化反应 根据分解葡萄糖、利用精氨酸、水解尿素等可初步鉴定支原体。4. 抵抗力 对热、干燥、低渗及多种消毒剂敏感，但对醋酸、结晶紫和亚碲酸盐有较强耐受性，可用于分离培养时抑制其他细菌生长,第二节 支原体,二、微生物学检验1. 肺炎支原体的鉴定 根据形态、菌落和生化反应特征，还可做以下试验帮助鉴定（1）溶血试验（2）生长抑制试验,第二节 支原体,2.解脲脲原体鉴定 解脲脲原体生物学特性对pH要求较低，可分解尿素产氨，使酚红指示剂变色，不分解葡萄糖、精氨酸，在鉴定中常用：（1）代谢抑制试验：解脲脲原体分解尿素，当加入特异性抗血清后，可抑制相对应血清型菌株生长，培养基中指示剂酚红不显色（2）生长抑制试验：同肺炎支原体鉴定操作。其结果必须在低倍镜下，观察制片周围抑菌环及宽度，该法虽特异但敏感性差,第二节 支原体,3. 支原体与细菌L型鉴别 支原体应与细菌L型相区别，后者在去除诱因后容易返祖为原细菌,第二节 支原体,三、临床意义支原体广泛存在于自然界中，主要引起人类呼吸道、泌尿生殖道感染等肺炎支原体的主要致病物质有P1蛋白、糖脂抗原和荚膜多糖，可引起人类原发性非典型肺炎人型支原体、解脲脲原体和生殖道支原体可通过性接触传播，为性传播疾病病原体，引起人类非淋球菌性和非衣原体性泌尿生殖道感染支原体无细胞壁，对青霉素、头孢菌素类抗生素不敏感，治疗常用红霉素、阿奇霉素、强力霉素等,返回章内容,第二节 支原体,第三节 衣原体,一、生物学特性形态、染色和生活周期 衣原体一般呈圆形或卵圆形。Giemsa染色呈淡蓝色或紫色。衣原体有独特的生活周期，以两种发育类型存在（1）原体：为细胞外存在形式，较小，卵圆形，中央有一致密的拟核，有感染性（2）始体或网状体：较大，圆形或不规则形，中央呈纤细的网状结构，无致密拟核。为细胞内繁殖型，代谢活跃。不能在细胞外存活，无感染性,汤飞凡,汤飞凡,汤飞凡,2. 培养特性 衣原体的培养方法有细胞或组织培养、鸡胚培养和动物培养。目前最常用的方法是细胞培养法，是衣原体诊断的金标准3. 抵抗力 衣原体抵抗力较弱，不耐热，对冷冻干燥有耐受性。不能用甘油保存。四环素、大环内酯类抗生素或青霉素、利福平等对其有抑制作用。鹦鹉热衣原体对磺胺类药物耐药,第三节 衣原体,二、微生物学检验1.直接细胞学检查 （1）Giemsa染色：不同的发育阶段衣原体的染色性有所不同。成熟的原体，Giemsa染色为紫红色，与蓝色的宿主细胞浆成鲜明对比。始体被染呈蓝色（2）包涵体染色沙眼衣原体在细胞浆内形成不同形态、密集的包涵体，包涵体内含有糖原，用Lugol碘液染色呈棕褐色斑块肺炎衣原体形成的包涵体呈致密的卵圆形，鹦鹉热衣原体在胞浆中形成疏松包涵体，两者都不含糖原，碘染色阴性,第三节 衣原体,2.血清学检测： 临床上多用商品诊断试剂盒，目前检测肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体主要采用微量免疫荧光检测和酶免疫测定。应用单克隆或多克隆抗体酶免疫法检测沙眼衣原体的脂多糖3.分子生物学检测： 用核酸杂交技术、PCR检测技术，可提高检测的敏感性和特异性,第三节 衣原体,返回章内容,三、临床意义沙眼衣原体感染范围较广，可侵害不同的系统和器官。主要有沙眼、包涵体性结膜炎、泌尿生殖道感染（如宫颈炎、输卵管炎、附睾炎、直肠炎、新生儿肺炎及中耳炎等）、性病淋巴肉芽肿衣原体感染后，免疫力不强。预防应注意个人卫生，管理好家禽，取缔卖淫嫖娼等。对病人积极治疗，可选取青霉素、四环素、利福平等药物内服或局部外用,第三节 衣原体,第四节 立克次体,一、普氏立克次体（一）生物学特性1.形态与染色 呈多形性，以短杆形为主，常用Giemsa染色，将立克次体染成紫色或蓝色2.培养特性 采用鸡胚、成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞进行分离和培养3.抗原构造 主要有群特异性和种特异性抗原。某些立克次体与变形杆菌OX19和OX2株有共同的抗原成分，可发生交叉反应,立克次医生（美国）,主要立克次体与变形杆菌菌株抗原交叉现象,第四节 立克次体,（二）微生物学检验1.分离培养 将标本接种于雄性豚鼠的腹腔内，接种后体温40或阴囊有红肿，表示已发生感染，若无阴囊红肿而体温40，则取动物脾组织接种鸡胚卵黄囊，培养后，用卵黄囊膜涂片检查2.分子生物学检测 应用PCR或核酸探针检测3.血清学检查 做外斐反应，即利用变形杆菌X菌株代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，用于人或动物血清中相关抗体的检查,第四节 立克次体,（三）临床意义普氏立克次体是流行性斑疹伤寒（虱传斑疹伤寒）病原体病人是唯一的传染源，经虱-人-虱方式传播。虱叮咬病人后在虱肠管上皮细胞繁殖，叮咬人时，其粪便排在人皮肤上，人因搔抓破损而引起感染。也可通过呼吸道和眼结膜感染。2周左右潜伏期后，骤然发病，常见高热、头痛、皮疹，可伴神经系统、心血管系统或其他脏器损害等症状病后免疫力持久。采用四环素类抗生素和氯霉素治疗，禁用磺胺类药物,第四节 立克次体,二、斑疹伤寒立克次体（一）生物学特性斑疹伤寒立克次体形态和染色、培养特性、抗原构造等均与普氏立克次体相似或相同（二）微生物学检验大规模流行时可采集鼠蚤、鼠虱、人虱进行分离培养，以确定传染源（三）临床意义 斑疹伤寒立克次体是地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）的病原体。鼠是主要贮存宿主。症状与流行性斑疹伤寒相似，但发病缓慢，病情轻，很少侵害神经系统、心肌等,第四节 立克次体,三、恙虫病立克次体（一）生物学特性恙虫病立克次体呈多形性，以短杆形或球杆状多见可