肾衰竭机能实验

影响肾泌尿功能的因素及急性肾功能不全,15预防一班 朱帅伟,1,实验目的,通过神经、体液因素来改变肾血流量、体液晶体渗透压及肾小管对电解质的重吸收，并观察它们对尿生成的影响。 学习氯化高汞复制急性肾功能不全的动物模型，观察急性肾功能不全时血、尿钠，尿蛋白、肾酚红排泄率的变化及肾形态学的改变，并根据实验结果分析和讨论急性肾功能不全的发病机制。观察速尿对急性肾功能不全动物模型的治疗效果，分析其可能的作用机制。,2,实验原理：,1、肾脏的功能：（1）泌尿功能 形成尿液，排出机体的代谢产物。（2）内分泌功能 分泌肾素、PG、EPO、1,25-(OH)2（3）灭活某些激素 如胃泌素、甲状旁腺素等。,3,2、影响尿生成的因素（1）影响肾小球滤过率的因素（2）肾小管和集合管重吸收及分泌功能,4,本实验通过建立急性肾功能不全的动物模型，Hg+进入血循环并在肾小管中反应，破坏了肾小管结构与功能，致使肾小管的阻塞和回漏，导致尿量明显减少。,5,急性肾功能不全模型的复制,给动物注射HgCl2 Hg2+进入血液循环经肾小球滤出与肾小管上皮细胞膜蛋白质的巯基结合Hg2+经吞噬作用聚集在细胞内与细胞器质膜结合并引起结构和功能破坏肾小管上皮细胞功能和结构的显著改变。,6,3、影响肾小球滤过率的因素,有效滤过压=肾小球毛细血管血压-（血浆胶体渗透压+肾小囊内压） (1)肾小球毛细血管血压 (2)囊内压 (3)血浆胶体渗透压 (4)肾血浆流量 (5)滤过系数,7,急性肾功能不全急性肾功能不全(ARI)是指短期内出现泌尿功能障碍导致排泄和调节功能不能维持，出现代谢废物、毒物蓄积，水、电解质代谢紊乱，酸碱平衡紊乱等机体内环境严重紊乱的病理过程。大部分急性肾功能衰竭患者尿量低于400 mL24 h称为少尿型急性肾功能衰竭。少部分患者尿量固定4001000 m124 h没有达到少尿的衡量指标称为非少尿型急性肾功能衰竭。,背景知识,8,肾前性急性肾功能衰竭肾性急性肾功能衰竭肾后性急性肾功能衰竭,分类：,9,发病机制,(一)肾血流量减少。肾小球滤过减少(1)肾前性因素可使循环血量下降从而使肾血液灌注压下降。肾 血流量减少。(2)肾前性因素可致交感一肾上腺髓质系统兴奋肾血管收缩。 肾血液灌流量减少。(3)肾前性因素可使细胞缺血缺氧，血管内皮细胞由于供能不足， 钠泵失灵，水、钠内流，发生肿胀。肾血管内血流减少。(4)可通过损伤组织、m管内皮细胞等致使肾血液流变学发生改 变如血液黏滞度上升等甚至启动凝血致肾内微循环血栓 形成微循环血流减少。,10,(二)肾小球病变 急性肾小球肾炎、狼疮性肾炎等病因可使肾小球滤过膜损伤，滤过面积减少，肾小球滤过率下降尿量减少。(三)肾小管阻塞 某些病因如挤压综合征、溶血所致血红蛋白、肌红蛋白释放人血可经肾小球滤过阻塞肾小管；还有些病因如肾毒物可致。肾小管上皮细胞坏死脱落阻塞肾小管使肾小囊内压明显上升肾小球内液体不易滤过。肾小球滤过率明显下降出现少尿。,11,(四)肾小管缺损，原尿回漏 该病因可致肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落基底膜断裂管内尿液漏入肾间质称原尿回漏。一方面直接使尿量减少另一方面可致间质水肿压迫。垮小管、肾血管造成肾小管阻塞及肾血流减少进一步使肾小球滤过率下降导致明显少尿。,12,病理 外观：呈“大白肾”状，肾脏体积增大， 表面苍白，质软。 纵切面：肾皮质苍白、缺血，髓质呈暗红色。功能代谢变化尿少，蛋白尿，尿钠增高水中毒高钾血症代谢性酸中毒氮质血症,13,速尿的作用及机制,速尿通用名为呋塞米1.药理作用：利尿作用:强效 快速 短暂扩张血管: 促进前列腺素的合成有关肾血流增加2.机制：呋塞米等袢利尿药属于高效利尿药，主要通过抑制肾小管髓袢厚壁段对NaCl的主动重吸收，使管腔液与髓质间液渗透压梯度差降低，肾小管浓缩功能下降，从而导致水、Na+、cl-排泄增多。由于远端小管Na+浓度升高，促进Na+-K+和Na+-H+交换增加，K+和H+排出增多,14,1、动物家兔，2.53.0kg，雌雄均可2、药品 氯化钠、20乌拉坦、酚红、 速尿、去甲肾 上腺素、葡 萄糖、氢氧化钠、焦锑酸钾、无水乙醇、肝素。,实验材料,15,3、器材 722分光光度计、离心机、婴儿秤、托盘天平、哺乳动物手术器械一套、静脉套管、膀胱套管、动脉夹、试管架、试管、离心管、刻度吸管、量杯、烧杯，注射器等,16,1.复制模型：24h前，1%HgCl2肌注1ml/Kg。2.观察动物一般状态。3.心脏采血3-5ml，静置10min3000rpm离心15min 吸取血清血钠。4.麻醉、固定。5.颈外静脉插管（颈静脉套管内应充满肝素）。6.暴露膀胱，收集尿液尿蛋白、尿钠 。7.尿道内口结扎，膀胱插管。（解释）8.术后稳定5-10 min，然后观察记录5min的尿量，记录完毕后开始以下操作,方法与步骤,17,心脏采血方法,确定心脏的生理部位。家兔的心脏部位约在胸前由下向上数第三与第四肋骨间。选择用手触摸心脏搏动最强的部位(剑状软骨左侧),去毛消毒。将稍微后拉栓塞的注射器针头由剑状软骨左侧呈30度-45度刺入心脏,当家兔略有颤动时,表明针头已穿入心脏,然后轻轻地抽取,如有回血,表明已插入心腔内,即可抽血;如无回血,可将针头退回一些,重新插入心腔内,若有回血,则顺心脏压力缓慢抽取所需血量。,18,家兔麻醉判断标准:,1.看角膜反射,用纱布等刺角膜几乎无反应就可 以了.2.夹鼻子无反应.3.肌肉松弛.4.呼吸深慢.,19,手术过程、血管辨认及颈外静脉插管、注意事项:,将家兔颈部正中剪毛，切开皮肤，分离一侧颈外静脉，在静脉下穿两根丝线，近心端用动脉夹夹闭，结扎静脉的远心端丝线，在远心端用眼科镊提起结扎线下方的静脉壁，用眼科剪45。在静脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入已充满肝素的静脉套管，用近心端的丝线结扎固定，松开动脉夹，用于输液。,20,21,注意事项,为了便于插管,颈外静脉应尽量分离得长一些。一般家兔4cm5cm,豚鼠和大鼠2cm-3cm;结缔组织尽量分离干净,否则插管时容易插到膜内;两根结扎线可通过一根线对折穿过血管下后剪断获得。远心端结扎线和备用结扎线一定要结扎紧,避免出血;动脉夹操作时一定要小心避免磨破血管,夹闭血以防夹闭不完全,22,5.插入血管内插管尽量长,此时易于固定。但是一定 不要插到动脉夹夹闭处,因为插管和动脉夹都是硬 性材料,两厢触碰易使动脉管破裂6.喷血时,应迅速找到出血口,并及时夹闭近心端血管, 并用棉球清理创面;若还是出血不止,则考虑是否是 远心端结扎线未扎紧,这时夹闭远心端;若是少量出 血,则可能只是毛细血管受到损伤,这是可用棉球轻 轻压迫创面即可止血。,23,家兔腹部手术的步骤 (膀胱插管),下腹部正中剪毛，在耻骨联合15cm作切口，长约4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，备测尿蛋白、尿钠用。在膀胱底部，找出两侧输尿管，在其下方穿线，然后将膀胱上翻，用丝线结扎尿道内口，在膀胱中上13作荷包缝合，然后提起膀胱，用眼科剪剪一小口，将充满蒸馏水的膀胱套管向着膀胱三角的方向插入膀胱中，结扎套管并固定，用于收集尿液。,24,注意事项,家兔膀胱十分脆弱,分离时应用镊子探查,避免直接用手术刀或剪刀粗暴分离;输尿管位置较深,分离和插管时需一人协助拨开肠子和拉扯膀胱,此时需注意用力大小,用力过大时膀胱会因尿液排出而迅速缩小(并不影响实验)如果可以,分离输尿管时避免损伤伴行血管,否则会大出血影响视线;输尿管近膀胱处结扎后,可略等片刻,待输尿管略充盈后在剪口插管,会容易很多插管的管子剪口需有一定锐度,但锐度过高易损伤输尿管;插管时,可转动插管,使斜面向下,否则易撕裂输尿管。,25,a、影响尿生成因素的观察(对照组家兔）,在各项观察之前先记录5 min的尿量作为对照，然后开始观察 1) 生理盐水20ml 2) 20%葡萄糖5ml 3) 0.01%去甲肾上腺素0.3ml 4) 1速尿1ml/kg 取0.1ml尿样备测尿钠,颈外静脉注射,26,b、*治疗（实验组家兔）,颈外静脉注射1%速尿溶液1ml/kg，观察给药后5分钟的尿量和30分钟的总尿量，从中取出0.1ml尿样置于干燥试管中备测尿钠用，测定给药后尿钠的含量，与给药前的尿钠（对照组家兔）进行比较,27,c.酚红排泄率测定,1)耳缘静脉 0.6酚红溶液 1ml 颈外静脉 20葡萄糖30ml 观察：从注射酚红起收集尿液，记录30min2)尿液500ml量杯+10%NaOH 10ml+蒸馏水 补充至500ml混匀 试管与标准比色系列比较 30min内酚红排泄率,28,d.形态学观察,（1）处死家兔，取出肾脏并称重，计算肾体比 (2）比较两家兔肾脏外形，纵向剖开肾脏， 观察皮质及髓质条纹、色泽等。,29,血钠和尿钠的测定,方法：尿液0.1ml+无水乙醇1.9ml用力振荡放置10min 3000rpm，5min取上清液。 比浊法测血钠和尿钠 520nm,30,血钠、尿钠的测定方法与步骤，数据整理及注意事项、分光光度计的使用,31,注意事项,1心脏取血时注射器不用抗凝。2颈外静脉插管时套管内应充满肝素。3膀胱插管时套管内应充满蒸馏水。4每次给药后观察尿量计时应从尿液改变后开始。5给速尿及酚红后，必须倒掉之前收集的尿液后才 能重新收集尿液，然后从中取尿样。6测尿钠时加无水乙醇后用力振荡，并且操作后立即 比色。7血清、标准液等试剂用量要准确。,32,分光光度计正确操作使用方法：,接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟.将灵敏度开关调至“1”